自己免疫性甲状腺疾患患者から単離された抗TSH受容体自己抗体遺伝子の応用

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08671150
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 赤水 尚史 京都大学, 医学研究科, 助手 (20231813)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松田 文彦 京都大学, 遺伝子実験施設, 助手 (50212220)
• Keywords: 免疫グロブリン遺伝子 / TSHレセプター / 抗TSHレセプター抗体 / バセドウ病 / リコンビナント抗体

Research Abstract

自己免疫疾患の発症機序は、遺伝的素因、免疫機構の異常及び感染などの環境的要因が関与する多因子性と考えられている。甲状腺に関連する自己免疫疾患としては、バセドウ病、橋本病及び原発性甲状腺機能低下症が知られており、これらについても上記の諸要因が種々論じられている。殊に、バセドウ病や機能低下症の一部では抗TSHレセプター抗体が発症や病態形成に直接的に関与することから、同抗体の構造や機能に関する研究は非常に重要である。
最近我々は、バセドウ病及び原発性甲状腺機能低下症患者から多数のモノクローナル抗TSHレセプター抗体産生リンパ球をクローニングし、同リンパ球から免疫グロブリン遺伝子を単離・解析しており、同抗体の一次構造を明らかにしてきた。そこで今回、単離された抗体遺伝子を用いて、TSH受容体抗体の自己免疫性甲状腺疾患発症機序を明らかにするために、以下に述べるような応用研究を行なつた。
1)抗TSH受容体抗体遺伝子を用いたリコンビナント抗体の作製:同抗体遺伝子を用いて、遺伝子工学的に抗体蛋白を再構成した。この実験によつて、2クローンについて生物学的に刺激型の抗TSH受容体抗体を得ることに成功した。現在、リコンビナント抗体を骨髄腫細胞n大量に産生させて精製し、マウスに投与することによって単離された抗体遺伝子の正当性を確認することを試みている。次いで、リコンビナント抗体を用いてTSH受容体蛋白の抗体結合エピトープなどの検討に資する予定である。
2)抗TSH受容体抗体遺伝子を用いたトランスジェニックマウスの作製:単離した抗体遺伝子を用いてトランスジェニックマウスを作成し、自己免疫性甲状腺疾患のモデル動物の確立をめざすためにそのDNAコンストラクトを作製中である。

Research Products

• [Publications] Akamizu T,Matsuda F,Okuda J,Li H,Kanda H,Watanabe T,Honjo T,Mori T: "Molecular analysis of stimulatory anti-thyrotropin receptor antibodies(TSAbs)involved in Graves' disease:Isolation and reconstruction of antibody genes,and production of monoclonal TSAbs" J Immunol. 157. 3148-3152 (1996)
• [Publications] Okuda J,T.Akamizu,F.Matsuda,J.Kanda,T.Watanabe,T.Mori: "Production of recombinant inhibitory anti-TSH receptor antibodies involved in primary hypothyroidisin" J Endocrinol Invest. 19:Suppl.to 6. 34 (1996)
• [Publications] Akamizu T,Matsuda F.Okuda J,Li H,Kanda H,Watanabe T,Honjyo T,Mori T: "Gene-engineering production of stimulatory anti-thyrotropin receptor antibodies involved in Graves' disease" 10th International Congress of Endocrinology. 81 (1996)
• [Publications] Koshiyama H,Sellitti DF,Akamizu T,Doi SQ Inoue D,Takeuchi Y,Sakaguchi H,Fukunaga Y,Nakao K: "Cardimyopathy associated with Graves' disease:A Possibility of ″Graves' cardiomyopathy″?" 10th International Congress of Endocrinology. 714 (1996)
• [Publications] Uematsu Yanagita M,Inoue D,Sakaguchi H,Fukunaga Y,Akamizu T,Koshiyama H,Nakao K: "Familial occurrence of hypothyroidism with thyroid stimulation-blocking antibody" 10th International Congress of Endocrinology. 639 (1996)
• [Publications] J.Okuda,T.Akamizu,F.Matsuda,H.Kanda,T.Watanabe,T.Mori: "Production of recombinant inhibitory anti-TSH receptor antibodies involved in primary hypothyroidism" 23rd Meeting of European Thytroid Association,Amsterdam,The Netherlands. 34 (1996)
• [Publications] M.M.Sale,T.Akamizu,T.D.Howard,H.Iwasaki,J.Jennings-Gee,S.S.Rich and D.W.Bowden: "Genetic mapping of the thyroid stimulating hormone receptor and association with autoimmune thyroid disease in Japaness patients" Proceeding of American Society of Human Genetics. (Abstract). (1996)
• [Publications] 赤水尚史: "甲状腺疾患におけるTSH受容体自己抗体" 内分泌・糖尿病科, 8 (1996)
• [Publications] 赤水尚史: "自己免疫性甲状腺疾患におけるTSH受容体抗体の意義-抗体側からみた分子レベルの研究" 医学のあゆみ, 3 (1996)