ウロキナーゼ発現抑制によるヒト悪性リンパ腫細胞の浸潤、転移能の抑制

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08671222
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 新谷 憲治 富山医科薬科大学, 医学部・臨床検査医学, 助教授 (50145116)
• Keywords: ウロキナーゼ / アンチセンス遺伝子 / リンパ腫細胞 / 遺伝子導入 / 浸潤転移能 / マトリゲル / cAMP

Research Abstract

まず、高度転移活性を有するRC-K8細胞のサブクローニングを行い、uPAを最も強く発現しているRC-K8細胞株を得た。次いで、ヒューマンサイエンス研究資源バンクから、ウロキナーゼ(uPA)cDNAを含むplasmid(bluescript)SKUK-8を購入した。そのプラスミドから制限酵素でuPA cDNA切り出し、antisense-orientedにpME発現ベクターに組み込んだ。次いで、このプラスミドを今回購入したGene Pulserを用いて電気的にRC-K8細胞にトランスフェクトした。G418を含むRPMI-1640でセレクションし、uPA産生が抑制されたneo-resistant細胞クローンの樹立を行った。約3ヶ月のG418を含むRPMI-1640で培養した結果、uPAの合成発色基質であるS-2444を用いた方法でもまたfibrin zymography法でも uPA活性が認められない細胞株と部分的にuPA産生が抑えられた細胞株が樹立された。現在それらのサブクローン化された細胞株を用い、浸潤能や転移能の検討が行われている。繊維芽細胞由来の細胞外マトリックスをコートしたマトリゲルの培養チャンバーで培養し、マトリゲルを通過した細胞数をMTT法で測定し、試験管内での細胞の浸潤活性を検討した。予備的実験では、残念ながら上記の細胞間で明かな差が得られていない。そこで、現在、免疫不全マウスの腹腔内に、上記の細胞を注入し、適当な時期にサクリファイし、顕微鏡的に臓器浸潤の有無を観察するin vivoでの転移活性を検討する実験を進めている。また、それとは別にcAMP存在下で培養するとRC-K8細胞のuPAの産生能の低下することが解っており、このcAMP処理RC-K8細胞の浸潤、転移能の検討も平行して行っている。

Research Products

• [Publications] N Nomura,K Niiya,et al: "Inhibitory effect of a synthetic prostacyclin analoque, Beraprost, on urokinase-type plasminogen activator expression" Thromb Haemost. 75(6). 928-932 (1996)
• [Publications] 新谷憲治: "RC-K8ヒト悪性リンパ腫細胞株における炎症性サイトカインによるウロキナーゼ(u-PA)の遺伝子発現制御" 臨床病理 2月臨時増刊. 特集(104). 150-158 (1997)