可溶性G-CSFレセプターの解明

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08671239
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 岡村 精一 九州大学, 医学部, 講師 (20136435)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 横山 俊宏 九州大学, 医学部, 医員 ; 浅野 嘉延 九州大学, 医学部, 助手 (60271110) ; 中島 衡 九州大学, 医学部, 助手 (70188960)
• Keywords: 可溶性G-CSFレセプター / G-CSF / cDNA / 先天性好中球減少症 / 急性骨髄性白血病 / 遺伝子発現 / スプライシング / セルソーター

Research Abstract

可溶性G-CSFレセプターの検出:ヒト血清をビオチン標識したG-CSFと孵置した後にnative PAGEで泳動し,ニトロセルロース膜に移したものとperoxidase(PO)標識streptavidinと反応させPOを発色させた.すると,95kDと105kDにバンドが検出された.G-CSFの分子量は約20kDを減じると,75kDと85kDのG-CSFと結合する血清蛋白の存在が考えられた.さらに,G-CSFレセプターの細胞外部分と細胞内部分のペプチドを合成し,それを各々抗原として家兎で抗体作製した.これらの抗体を用いてのウエスタンブロットでもほぼ同じ大きさにG-CSFレセプターのバンドを認めた.
可溶性G-CSFレセプターの構造:ヒト好中球系細胞の成熟段階における,可溶性G-CSFレセプターの発現状況をRT-PCR法で検索した.可溶性G-CSFレセプターは膜貫通部を欠いたII型のcDNAがコードしていると考えられ,膜貫通部を挟むプライマーを用いてRT-PCRを行うと,これは野性型(I型)に比べて,短いバンドとして検出される.ヒト骨髄細胞をセルソーターで成熟段階にしたがい,分離してG-CSFレセプターの膜貫通部を挟むプライマーを用いてRT-PCRを行うと,2つのバンドが検出され,可溶性G-CSFレセプター由来の短いバンドは成熟段階が進行するに従いその割合が増加していた.
可溶性G-CSFレセプターの作用:可溶化したマウスG-CSFレセプターをヒト骨髄細胞に試験管内で作用させた.これはG-CSFによる顆粒球コロニー形成刺激作用を抑制した.さらに,こらは一部のヒト骨髄性白血病細胞の増殖を抑制した.一方,先天性好中球減少疾患者から膜貫通部を含む第15エクソン全体が欠失しているクローンを得た.

Research Products

• [Publications] Asano Y.: "Effect of the chimeric soluble granulocyte colony-stimulating factor receptor on the proliferation of leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Cancer Research. 57(16). 3395-3397 (1997)
• [Publications] Niiro H.: "Regulation by interleukin-10 and interleukin-4 of cyclooxygenase-2 expression inhuman neutrophils" Blood. 89. 1621-1628 (1997)
• [Publications] Asano Y.: "Effect of(-)-epigallocatechin gallate on leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Life Sciences. 60(2). 135-142 (1997)
• [Publications] Asano Y.: "Interleukin-10 inhibits the autocrine growth ofleukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." International Journal of Hematology. 66. 445-450 (1997)
• [Publications] Tanaka Y.: "Detection of polymorphisms within the human IL-10 receptor DNA gene sequence by RT-PCR RFLP" Immunogenetics. 46. 439-441 (1997)
• [Publications] Shibata S.: "Analysis of the granulocyte colony-stimulating factor receptor gene structure using PCR-SSCP in the myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome" European Journal of Haematology. (印刷中).
• [Publications] Komaki G.: "Alterations in lymphocytes subsets and pituitary-adrenal gland-related hormones during fasting" American Journal of Clinical Nutrition. 66. 147-152
• [Publications] 岡村精一: "G-CSFレセプターを介する増殖・分化のシグナル伝達" 医学のあゆみ. 180. 826-831 (1997)
• [Publications] 岡村精一: "G-CSFレセプターと好中球減少症" 日常診療と血液. 7. 1441-1420 (1997)
• [Publications] 岡村精一: "Hodgkin病に対する治療の進め方" 内科. 80. 461-465 (1997)
• [Publications] 広田雄一: "悪性リンパ種の治療" 血液・腫瘍科. 35. 89-102 (1997)
• [Publications] 下田和哉: "G-CSFレセプターを介する細胞内情報伝達機構" 臨床血液. 38. 193-195 (1997)
• [Publications] 下田和哉: "G-CSFレセプターを介するシグナル伝達機構" 臨床免疫. 30. 52-58 (1998)
• [Publications] 岡村精一: "G-CSFレセプターのシグナル伝達機構とその異常.Annual Review 血液97" 中外医学社,東京, 16 (1997)
• [Publications] 岡村精一: "G-CSFレセプター異常と好中球減少症.Annual Review 血液98" 中外医学社,東京, 7 (1998)
• [Publications] 岡村精一: "悪性リンパ腫の化学療法-適応と実際-.白血病リンパ腫骨髄今日の診断と治療" 中外医学社,東京, 23 (1997)
• [Publications] 岡村精一: "G-CSF受容体異常.キーワード1997-'98血液" 先端医学社(印刷中),