1996 Fiscal Year Annual Research Report
着床現象におけるβ1インテグリンファミリーの生理的役割
Project/Area Number |
08671925
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Research Institution | Kyorin University |
Principal Investigator |
塩川 滋達 杏林大学, 医学部, 助手 (50241005)
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Keywords | β_1integrin / Implantation |
Research Abstract |
1)Bravermanらの方法に従ってインフォームドコンセント後、手術および人工妊娠中絶時に採取した組織より増殖期、分泌期子宮内膜間質および妊娠初期脱落膜間質の培養細胞を作成し、研究材料とした。2)各培養細胞を10日間培養した後EDTAにて単細胞浮遊液を作成し、1次抗体に抗β_1インテグリン抗体、2次抗体にFITC標識goat anti-mouse IgGを使用し、細胞表面のβ_1インテグリンの発現をFCMにて測定した。その結果分泌期子宮内膜間質および妊娠初期脱落膜間質細胞表面にβ_1インテグリンの発現が認められた。3)妊娠初期脱落膜培養細胞を^<35>S-methioninにより細胞標識し、抗β_1インテグリン抗体にて免疫沈降した結果、還元条件下で130kDaのβ_1インテグリンに相当するバンドおよび210.165kDaのα_1,α_2インテグリンと思われるバンドが出現した。これより妊娠初期脱落膜はβ_1インテグリンファミリーを生合成することが証明された。4)培養細胞よりguanidine-thiocyanate法にてtotalRNAを抽出し、^<32>PdATPを用いてヒトβ_1インテグリンcDNAをプローブとしてNorthern blot解析した結果メッセージレベルでのβ_1インテグリンの発現が証明された。5)7週令のCD-l雌マウスをPMSG-hCGにて過排卵誘起し、同系雄マウスと交配しhCG投与後96h後に子宮内初期胚(桑実胚および初期胞胚)を回収し脱落膜間質細胞と共培養した。コントロール群にはnormal mouse IgGを、実験群に抗β_1インテグリン抗体(mβ_1Ab)を加えトロホブラストの進展した面積をオリンパスSP500にてコンピュータ画像解析した。その結果抗β_1インテグリン抗体は、マウス初期胚のハロホブラストの進展を濃度依存性に抑制した(コントロール,102μm^2;mβ_1Ab2ng/ml.77μm^2;mβ_1Ab20ng/ml;52μm^2,mβ_1Ab200ng/ml,38μm^2)。以上よりβ_1インテグリンは分泌期子宮内膜間質および脱落膜細胞で生合成され、トロホブラストの進展に関与していると考えられた。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] S.Shiokawa: "Expression of β_i Integrins in Human Endimetrial Stromal and Decidual Cells'" J Clin Endocrinol Metab. 81・4. 1533-1540 (1996)
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[Publications] S.Shiokawa: "Function of β_i Integrins on Human Decidual Cells during Inplantation." Biol Reprod. 54. 745-752 (1996)