1997 Fiscal Year Annual Research Report

GPI-アンカー型補体制御因子(CD59)のシグナル伝達機構

Research Project

Project/Area Number	08672654
Research Institution	Osaka Medical College
Principal Investigator	畑中道代大阪医科大学, 医学部, 助手 (50218484)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	瀬谷司大阪府立成人病センター, 6部, 部長
Keywords	補体制御因子 / CD59 / GPI-アンカー蛋白 / シグナル伝達 / ペプチド / 細胞内Ca^<2+> / C9
Research Abstract	GPI-アンカー型蛋質はglycosyl phosphatidylinositolを介して細胞膜に結合したユニークな構造をもつ蛋白質群である。GPI-アンカー型蛋白質を抗体でクロスリンクすると、細胞内Ca^<2+>濃度の上昇、細胞増殖が誘導されることから、これらの分子がシグナル伝達機能をもつと考えられている。しかしながら、細胞内ドメインを持たないこれらの分子が、細胞質側にどのようにシグナルを伝えるのかのかは不明である。本研究では、GPI-アンカー型補体制御因子CD59に焦点をあて、これをモデルとしGPI-アンカー型蛋白質のシグナル伝達機構について明らかにすることを目的とする。 GPI-アンカー型蛋白質による細胞の活性化は、特異抗体を作用後、さらに2次抗体でクロスリンクするという方法が一般に用いられている。このような方法では、Fcを介した活性化の関与を否定できない.また、細胞の活性化を免疫沈降などで検出する際には、抗体の存在が測定上の障害となる。そこで、シグナル伝達を誘導しうるligandを見つけ、これによる測定法を開発することが重要である。CD59は、C9に結合し、C9分子の重合を阻害することにより補体系を抑制する。同様にC9分子が、C59の細胞活性化の際のligandとなりうる可能性がある。本年度は、種々のC9ペプチドを合成し、これらの効果を「細胞内Ca濃度の上昇」を指標として測定した。その結果、ペプチド2(407-436)がJurkat細胞で、細胞内Ca^<2+>を特異的に上昇させることが明らかとなった。至適濃度は50μMであった。細胞外のCa^<2+>を除くと、細胞内Ca濃度の上昇は50%程度抑制されたことから、Caは細胞外、細胞内、両者に由来すると考えられる。今後、チロシンキナーゼの活性化、細胞増殖などへの効果についても検討しCD59シグナル伝達が誘導される系を確立したいと考えている。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] 畑中道代, ら: "Cellular distribution of a GPI-anchored complement regulatory protein CD59:honodimerization on the surface of HeLa and CD59-trasnfected CHO cells." J.Biochem.123・4. in press (1998)
[Publications] 瀬谷司, ら: "The CD64 transmembrane domain is required for efficient measles virus-mediated syncytium formation." Biochem.J.322. 135-144 (1997)
[Publications] 松本美佐子, ら: "A novel protein that paticipates in nonself discrimination of malignant cells by homologous complement." Nature Med.3・11. 1266-1270 (1997)
[Publications] 畑中道代, ら: "Mechanisms by which GPI-anchored complement regulatory proteins,DAF and CD59,are lost in human leukemia cell lines." Biochem.J.314. 969-976 (1996)
[Publications] 宮川周士, ら: "C5b-8 step lysis of swine endotherial cells by human complement and functional feature of transfectected CD59." Scand.J.Immunol.43. 361-366 (1996)
[Publications] 瀬谷司, ら: "A rapid and efficient purification procedure of human complent receptor type 1(CR1,CD35)." J.Biochem.Biophys.Methods.32. 69-76 (1996)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

GPI-アンカー型補体制御因子(CD59)のシグナル伝達機構

Principal Investigator

畑中 道代 大阪医科大学, 医学部, 助手 (50218484)

Research Products

[Publications] 畑中道代, ら: "Cellular distribution of a GPI-anchored complement regulatory protein CD59:honodimerization on the surface of HeLa and CD59-trasnfected CHO cells." J.Biochem.123・4. in press (1998)

[Publications] 瀬谷 司, ら: "The CD64 transmembrane domain is required for efficient measles virus-mediated syncytium formation." Biochem.J.322. 135-144 (1997)

[Publications] 松本美佐子, ら: "A novel protein that paticipates in nonself discrimination of malignant cells by homologous complement." Nature Med.3・11. 1266-1270 (1997)

[Publications] 畑中道代, ら: "Mechanisms by which GPI-anchored complement regulatory proteins,DAF and CD59,are lost in human leukemia cell lines." Biochem.J.314. 969-976 (1996)

[Publications] 宮川周士, ら: "C5b-8 step lysis of swine endotherial cells by human complement and functional feature of transfectected CD59." Scand.J.Immunol.43. 361-366 (1996)

[Publications] 瀬谷 司, ら: "A rapid and efficient purification procedure of human complent receptor type 1(CR1,CD35)." J.Biochem.Biophys.Methods.32. 69-76 (1996)

畑中道代大阪医科大学, 医学部, 助手 (50218484)

[Publications] 瀬谷司, ら: "The CD64 transmembrane domain is required for efficient measles virus-mediated syncytium formation." Biochem.J.322. 135-144 (1997)

[Publications] 瀬谷司, ら: "A rapid and efficient purification procedure of human complent receptor type 1(CR1,CD35)." J.Biochem.Biophys.Methods.32. 69-76 (1996)