トランスジェニックネマト-ダを用いた生物検定法の確立

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08760321
• Research Institution: Suntory Institute for Bioorganic Research
• Principal Investigator: 河野 強 (財)サントリー生物有機科学研究所, 研究員 (50270567)
• Keywords: ネマト-ダ / グルタミン酸トランスポーター / ゲノムDNA / 生物検定法

Research Abstract

報告者は、本研究に於いて、線虫Caenorhabditis elegansのグルタミン酸トランスポーターをコードするcDNAおよびゲノムDNAの構造を明らかにし、さらに、グルタミン酸トランスポート活性を検討した。
1)グルタミン酸トランスポーターをコードするcDNAのクローニング
cDNAライブラリーのスクリーニングおよびRT-PCRを行うことにより、2種類の異なるcDNAを得た(Ceglut-1,Ceglut-2)。両cDNAがコードするタンパク質は、それぞれ503および492アミノ酸残基より成り、哺乳動物のグルタミン酸トランスポーターと50-60%の相同性を示した。また、両タンパク質は、N末端11残基以外は完全に一致していた。これは、無脊椎動物のグルタミン酸トランスポーターに関する初めての報告である。
2)ゲノムDNAの解析
線虫Caenorhabditis elegansのゲノムプロジェクトより情報を入手し、上記cDNAの配列をもとに詳細な解析を行った。その結果、(1)グルタミン酸トランスポーター遺伝子は性染色体に位置すること、(2)9個のエクソンで構成されること、(3)Ceglut-1のN末端11残基は第一エクソンにコードされること、(4)従って、Ceglut-2はCeglut-1のスプライシングバリアントであることを明らかにした。
3)グルタミン酸トランスポート活性の検討
アフリカツメガエル卵母細胞の発現系を用いてCeglut-1およびCeglut-2がコードするグルタミン酸トランスポーターの活性を検討した。その結果、(1)Ceglut-1およびCeglut-2は、それぞれ、コントロール(水を注入したもの)の4倍、16倍のトランスポート活性を有すること、(2)従って、第一エクソンにコードされるN末端11残基がトランスポート活性を制御していることを明らかにした。

Research Products

• [Publications] Tsuyoshi,Kawano: "Molecular Cloning of a cDNA for the Glutamate Transporter of the Namatode Caenorhabditis elegans" Biochem.Biophys.Res.Commun.228. 415-420 (1996)
• [Publications] Tsuyoshi Kawano: "Structure and Activity of a New Form of the Glutamate Transporter of the Nematode Caenorhabditis elegans" Biosci.Biotech.Biochem.(in press). (1997)
• [Publications] Tsuyoshi Kawano: "Molecular Cloning of the cDNA Derived from the Nematode Caenorhabditis elegans Encoding the Peptide Promoting Uptake of Glutamate" Peptide Chemistry. (in press). (1997)