生体部分肝移植後のEBウイルス感染症の早期診断法の確立に関する研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08770926
• Research Institution: Shinshu University
• Principal Investigator: 中澤 勇一 信州大学, 医学部, 助手 (10273088)
• Keywords: 生体部分肝移植 / Epstein-Barrウイルス / In-situ hybridization

Research Abstract

今年度はEBER1をプローブとするin situ hybridization(以下ISHと略)の系とEpstein-Barr virus(以下EBVと略)のDNA定量目的のPCR測定系を設立した。
いずれも、患者末梢血液をサンプルとし測定するものである。
移植患者の移植前、移植後第一日、同3日、同7日、同14日、同30日、同60日に検体をサンプリングした。また、外来患者においても、EBV感染が疑われた場合は適宜サンプリングした。
1、ISH
EBVのRNAプローブを購入し、さらにEBV感染細胞であるRaji cellを購入し陽性コントロールとした。染色に関してはin situ hybridization検出キットを購入使用した。陽性コントロールに対しては良好にEBV感染リンパ球の検出が可能であった。また臨床からえられた検体において陽性細胞は、全ての症例において検出されなかった。これについては、実際にEBV感染細胞が存在しなかったのか、或いは技術的問題にて検出できなかったのか、この2点が考えられたがISHに関しては、ある程度の染色の技術の習熟が必要と考えられ、今後検査施行件数をかさねたうえで検討、対処して行きと考える。今回は、EBER1プローブにてLatent infectionのリンパ球の検出のみ施行し、BHLF1プローブによるLytic infectionのリンパ球の検出は施行しなかった。
2、PCR
上記の時期に移植患者の血液をサンプリングしDNA抽出液キットを用いて全血中のDNAを抽出した。EBVのtypeA,typeBそれぞれのEBNA1領域のプライマーを設定し、まず、それぞれの検体中のEBVがtypeAかあるいは、typeBかを通常のPCRの方法を用いて鑑別、同定した。
また、別にtypeA,typeBそれぞれのEBVを定量のPCRに用いるcompetitorとするために、段階的に希釈したコントロールを作成した。PCRによるEBVのDNA定量はsemi-nested competitivePCRにて施行した。PCRによる、typeA,Bの鑑別は(EBV-PCR定性)は、全例とも可能であった。しかしながら定量に関しては、検体サンプリングの初期量に問題があると考えられ今後の検討、追及が必要と考えられた。

Research Products

• [Publications] 中澤勇一: "臓器移植後のPTLD" 医学のあゆみ. (in press). (1997)
• [Publications] Yuichi Nakazawa: "The Efficacy of Quantitative Analysis of Epstein-Barr Virus-Infected Deripheral Blood Lymphocytes by in situ Hybridization of EBER1 Following Living-Related Liver Trans platation : A case Report." Transplantation. (in press). (1997)