1996 Fiscal Year Annual Research Report
CMV感染症に対するペプタイドワクチン療法の開発と臨床応用に関する基礎的検討
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08770930
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
角田 卓也 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (30275359)
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| Keywords | CMV / CTL / peptide |
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| Research Abstract |
1. pp65 truncated recombinant vaccinia virusの樹立
CMVの核マトリックスタンパクであるpp65をN末端より100アミノ酸ごと制限酵素でtrucationしたmutation formを作り、vaccinia virusのvectorであるpSC11MCSにligateし種々のrVacをhomologous recombinationで樹立した。full length (606)-pp65rVac、458 (Not I site)-pp65 rVac、383 (Hind III site)-pp65 rVac、316 (Sma I site)-pp65 rVac、225 (BstEII site)-pp65rVac、 122 (BsrBI site)-pp65 rVac、0-pp65 rVacを樹立し、必要に応じさらに細かい範囲のrVacを樹立した。また、T7tag認識sequenceを組み込んで、樹立したrVacのタンパク発現をT7tag抗体を用いWestern Blotting法で確認した。
2. HLA class I拘束性CMV pp65特異的CTLクローンの樹立
CMVはfibroblastには感染するが、T細胞には感染しない特性を利用し、CMVを感染させた自己のfibroblastを刺激細胞として用い、CMV特異的CTLを誘導した後、CMV pp65特異的CTLを樹立した。樹立したCTLクローンが、CMV pp65特異的か否かを、full length pp65 rVacに感染した自己のEBV immortalized cell (LCL)を標的細胞としてクローム遊離試験(CRA)で決定し、同様にHLA class I拘束性をfull length pp65 rVacに感染した種々のLCLに対する障害活性および抗HLA class I抗体によるblocking assayにて、HLA B35拘束性pp65特異的CTLクローンをの樹立に成功した。
3. ペプタイドのmapping
樹立したCTLクローンを用い、1.で樹立した各種のpp65 truncated rVacを感染した自己のLCLを標的細胞としてCRAを施行した。pp65のC末端から数えて122番目の範囲内に存在することを解明した。
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[Publications] Takuya Tsunoda: "Clonal and functional analysis for the augmentation of tumor-infiltrating lymphocytes by interleukin 4" British Journal of Cancer. 74. 1085-1089 (1996)
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[Publications] Takuya Tsunoda: "Interleukin 4 inhibits LAK and inital phase TIL activity via interleukin 2 receptor" International Journal of Oncology. 7. 1117-1121 (1995)
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[Publications] Masaji Tani: "Generation of CD4+ cytotoxic T lymphocytes stimulated by immobilized anti-CD3 monoclonal antibody and interleukin-2 cancer patients" International Journal of Cancer. 60. 802-807 (1995)
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[Publications] Shizuma Mizobata: "Fibronectin promotes the proliferation of cytotoxic T lymphocytes generated from cancer patients" British Journal of Cancer. 74. 1598-1604 (1996)
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[Publications] 谷村 弘: "原因不明の外科感染症" 日本外科学会雑誌. 97. 1066-1071 (1996)
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[Publications] 角田卓也: "消化器外科における深在性真菌症" MEDICAMENT NEWS. 1500. 6-7 (1996)
