cDNAセレクション法による植物の形態形成および胚発生に関与する遺伝子の単離

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08780666
• Research Institution: The Institute of Physical and Chemical Research
• Principal Investigator: 関 原明 理化学研究所, 植物分子生物学研究室, 基礎科学特別研究員 (80281624)
• Keywords: シロイヌナズナ / ラテックス粒子 / cDNAセレクション法 / コスミドクローン

Research Abstract

我々は、これまでにラテックス粒子に共有結合したシロイヌナズナ由来のYACやコスミドクローンのDNAを用いて、cDNAを選択することにより、染色体の領域特異的なサブライブラリーを作製し、そしてそのライブラリーからcDNAを単離する方法(cDNA selection法)を開発している。本研究では、花芽形成の遅延に関与する遺伝子(fwa)、ABAのシグナル伝達に関与する遺伝子(abil)、球状胚から心臓型胚への分化に関与する遺伝子(emb20)がマッピングされた領域付近のcDNAを、cDNA selection法を用いて単離した。
シロイヌナズナの第4染色体上に位置するabil遺伝子を含む領域をカバーする6個のコスミドクローンからなるコンティグを用いて実験を行った。これまでに、6個のコスミドクローンから計18種類のcDNAを単離した。その結果、これらコスミドコンティグ内に存在することがわかっていた遺伝子である、abil遺伝子、rps2遺伝子、カゼインキナーゼI遺伝子などが単離され、この方法により巨大なDNA領域内に存在するcDNAを正しく選択できることが示された。単離されたcDNAの中には、既知の遺伝子とホモロジーがないものや、また、カチオニックパーオキシダーゼ遺伝子や酵母のホスファチジルセリンデカルボキシラーゼ2遺伝子とホモロジーを有するものなど、新しい遺伝子が11個存在していた。単離された遺伝子の内、上記変異遺伝子の候補遺伝子について、アンチセンスcDNAを過剰発現させるベクターを構築し、遺伝子導入し形質転換植物(導入遺伝子の発現が抑制された変異体)の作出を進めている。その後、形質転換体での遺伝子の発現パターンおよび表現型を解析し遺伝子の機能を調べる予定である。

Research Products

• [Publications] Seki,M.: "Amplification of long targets of approximately SOKb from cloned cosmid inserts of Arabidepsis thaliana" DNA Research. VOL.3.NO.2. 107-108 (1996)
• [Publications] 林田信明: "シロイヌナズナのゲノム研究の及ぼす波紋" 細胞工学別冊 植物細胞工学シリーズ. 5. 21-28 (1996)
• [Publications] Seki,M.: "Transient expression of foreign genes in tissues of Arabielopsis thaliana by bombardment-mediated transformation. Methods in Molecular Biology." Eds.by Salinas,J.and Martinez-Zapater,J.M.HUMANA PRESS INC.(発表予定),
• [Publications] 篠崎一雄: "遺伝子ライブラリーの調製.新版 微生物学実験法." 講談社サイエンティフィク(発表予定),