1996 Fiscal Year Annual Research Report

テトラヒメナの新しいCa^<2+>結合蛋白質の研究

Research Project

Project/Area Number	08874118
Research Institution	University of Tsukuba
Principal Investigator	沼田治筑波大学, 生物科学系, 助教授 (50189354)
Keywords	テトラヒメナ / カルシウムイオン / カルモデュリン / ダイニン / 繊毛 / 細胞骨格
Research Abstract	本研究はテトラヒメナの3種類のCa^<2+>結合蛋白質(分子量23,000と25,000のテトラヒメナCa^<2+>結合蛋白質[TCBP-23とTCBP-25]とカルモデュリン)の機能を解明することによって「Ca^<2+>が関与する生命現象がCa^<2+>結合蛋白質の分業体制によって制御されている。」という仮説を検証することを目的とする。本年度は次の実験を行った。 (1)TCBP-23とTCBP25の細胞内機能を明らかにするために、これらの蛋白質に結合する蛋白質をゲルオーバーレイ法で検討した。その結果、テトラヒメナの膜の裏打ち構造であるエピプラズマの主要蛋白質である分子量116,000(p116)と130,000(p130)の蛋白質がCa^<2+>依存的にTCBP-23やTCBP-25に結合することが判った。現在、p116とp130の精製を行っている。 (2)繊毛運動のCa^<2+>制御とカルモデュリンの関係を調べるため、テトラヒメナ・カルモデュリンの大量調製法を開発し、カルモデュリンのアフィニティーカラムを作成した。これを用いて、繊毛の膜分画、ダイニン分画各々にカルモデュリン結合蛋白質が存在するかどうかを検討した。その結果、繊毛の膜分画の分子量3万の蛋白質がCa^<2+>依存的にカルモデュリンに結合することが判った。 (3)TCBP-23とTCBP-25の遺伝子破壊を行うためのtargeting vectorsの作成を行った。現在これらのvectorsをテトラヒメナ細胞に導入して遺伝子破壊を試みている。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Kurasawa,Y.,Hanyu,K.,Watanabe,Y.and Numata,O: "F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α is regulated by Ca^<2+>/calmodulin." J.Biochem.Vol.119. 791-798 (1996)
[Publications] Hanyu,K.,Numata,O.,Takahashi,M.and Watanabe,Y: "Immunofluorescence localization of a 23-kDa Tetrahymena calcium-binding protein,TCBP-23,in the cell cortex." J.Biochem.Vol.119. 914-919 (1996)
[Publications] Kurasawa,Y.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Characterization of F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α investigated with rabbit skeletal muscle actin." Zool.Sci.Vol.13. 371-375 (1996)
[Publications] Kato,M.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Tetrahymena nuclear proteins that bind to a micronucleus-specific sequenceduring vegetative growth." Zool.Sci.Vol.13. 527-531 (1996)
[Publications] Numata,O.,Yamazaki,A.and Watanabe,Y: "Tetrahymena 14-nm filament protein (49K protein) and citrate synthase are expressed by the same gene." Europ.J.Protistol.Vol.32 Suppl.1. 108-113 (1996)
[Publications] Kanzawa,N.,Numata,O.,Watanabe,Y.and Maruyama,K: "Identification and characterization of Tetrahymena myosin." Comp.Biochem.Physiol.Vol.115B. 547-551 (1996)
[Publications] Watanabe,Y.,Hanyu,K.,Takemasa,T.and Numata,O: "TCBP-25.In Guidebook to the Calcium Binding-Proteins (Celio,M.R ed.)" Sambrook and ToozePublication at Oxford University Press, 4 (1996)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

テトラヒメナの新しいCa^<2+>結合蛋白質の研究

Principal Investigator

沼田 治 筑波大学, 生物科学系, 助教授 (50189354)

Research Products

[Publications] Kurasawa,Y.,Hanyu,K.,Watanabe,Y.and Numata,O: "F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α is regulated by Ca^<2+>/calmodulin." J.Biochem.Vol.119. 791-798 (1996)

[Publications] Hanyu,K.,Numata,O.,Takahashi,M.and Watanabe,Y: "Immunofluorescence localization of a 23-kDa Tetrahymena calcium-binding protein,TCBP-23,in the cell cortex." J.Biochem.Vol.119. 914-919 (1996)

[Publications] Kurasawa,Y.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Characterization of F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α investigated with rabbit skeletal muscle actin." Zool.Sci.Vol.13. 371-375 (1996)

[Publications] Kato,M.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Tetrahymena nuclear proteins that bind to a micronucleus-specific sequenceduring vegetative growth." Zool.Sci.Vol.13. 527-531 (1996)

[Publications] Numata,O.,Yamazaki,A.and Watanabe,Y: "Tetrahymena 14-nm filament protein (49K protein) and citrate synthase are expressed by the same gene." Europ.J.Protistol.Vol.32 Suppl.1. 108-113 (1996)

[Publications] Kanzawa,N.,Numata,O.,Watanabe,Y.and Maruyama,K: "Identification and characterization of Tetrahymena myosin." Comp.Biochem.Physiol.Vol.115B. 547-551 (1996)

[Publications] Watanabe,Y.,Hanyu,K.,Takemasa,T.and Numata,O: "TCBP-25.In Guidebook to the Calcium Binding-Proteins (Celio,M.R ed.)" Sambrook and ToozePublication at Oxford University Press, 4 (1996)

沼田治筑波大学, 生物科学系, 助教授 (50189354)