真核生物における環境適応応答調節遺伝子ファミリー(two-component system)の単離と構造解析

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08876020
• Research Institution: Kinki University
• Principal Investigator: 内海 龍太郎 近畿大学, 農学部, 教授 (20151912)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 吉岡 佐知子 近畿大学, 農学部, 助手 (80200939) ; 田辺 寛之 近畿大学, 農学部, 講師 (40257986)
• Keywords: クラミドモナス / 分裂酵母 / 2-component system

Research Abstract

分裂酵母,クラミドモナスcDNAライブラリーをファジミドベクターを用い,作製し,その後にtwo-component systemに属すると思われるクローンをスクリーニングした.two-component systemにおいては,センサーとレギュレーター蛋白質において,保存されたアミノ酸領域が特定されている.これらの保存領域を一方のプライマーに選択し,かた一方のプライマーとして,ベクター側に存在する既知のシーケンスを選択し,cDNAライブラリーを用いて,PCR反応をおこなった.また,クラミドモナスを光照射下で培養し,特異的なcDNAクローンを取得するために,RACEPCR法をおこなった.これらの結果,得られたクローンを用い,大腸菌において,発現させ,センサー,レギュレーターとしての機能解析を行った.つまり,大腸菌RU1012(ΔenvZ,φompC-lacZ)において,今回単離された遺伝子によりコードされた蛋白質がクロストーク反応をおこし,外膜蛋白質の発現を促すかどうか調べられた.これらの結果,分裂酵母,クラミドモナス細胞においても,細菌環境応答遺伝子,2-component systemに相同な遺伝子が存在することが,示唆された.