CREB/ATF1ドミナント・ネガティブ分子の構築と遺伝子改変マウスの作成

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08877025
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 萩原 正敏 名古屋大学, 医学部, 助教授 (10208423)
• Keywords: 神経発生 / ドミナントネガティブ / RL-ATF1 / CREB / PC12細胞

Research Abstract

本研究の目的は、CREB/ATF1ファミリーが神経発生上どのような役割を果たしているかを解明することである。点突然変異をATF1分子中に導入することにより独自のドミナントネガティブ分子を構築することからスタートした。このドミナントネガティブATF1は理論的には内在性のCREB、ATF1、CREMのいずれともヘテロダイマーを形成し、RL-ATF1は2量体のDNA結合能を、SA-ATF1はドミナントネガティブリン酸化による転写活性化能を失わせる。このことにより、CREB/ATF1ファミリーによる転写制御を抑制できるのではないかとのアイデアに基づいている。
結果は、SA-ATF1ドミナントネガティブ作用を細胞内では示さなかったのに対し、RL-ATF1はCRE-CATの発現を抑制した。驚いたことには、所期の予想に反して、RL-ATF1はCREBと選択的にヘテロダイマーを形成していることが判明した。このRL-ATF1をPC12培養細胞内で過剰発現させたところ、この細胞のcAMP依存性の神経分化が抑制され、神経細胞の分化課程で、CREB/ATF1ヘテロダイマー分子が重要な役割を果たしていることが判明した。現在さらに、マウス個体内でRL-ATF強制発現させたトランスジェニックマウスを作成中で、その遺伝子発現や学習行動等に与える変化を検討する予定である。

Research Products

• [Publications] Okada,H.,: "Gene therapy against an experimental glioma using adeno-associated virus vectors." Gene Therapy. vol.3. 957-964 (1996)
• [Publications] Moriguchi,T.,Toyoshima,F.et al.: "Purification and identification of a major activation for p38 from osmotically shocked cells. Activation of MARKK6...." J.Biol.Chem.Vol.271. 26981-26988 (1996)
• [Publications] Shimomura,A.,Ogawa,Y.et al.: "Calmodulin-dependent protein kinase II potentiats transcriptional activation through ATF1,but not CREB." J.Biol.Chem.vol.271. 17957-17960 (1996)
• [Publications] Moriguchi,T.,Kuroyanagi,N et al.: "A novel kinase cascade mediated by MAPKK6 and Mkk3." J.Biol.Chem.vol.271. 13675-13679 (1996)
• [Publications] Yasunami,M.,Suzuki,K.et al.: "Molecular cloning and characterization of a cDNA encoding a novel basic helix-loop-helix protein structurally related...." Biochem.Biophys.Res.Commun.vol.220. 754-758 (1996)
• [Publications] Okada,H.,Yoshida,J.,et al.: "Suppression of CD44 expression decreases migration and invasion of human glioma cells." Int.J.Cancer.vol.66. 255-260 (1996)