1996 Fiscal Year Annual Research Report

リボザイムを用いた血管作動性ペプチド遺伝子"knock down"マウスの開発-テトラサイクリン誘導遺伝子発現システムのin vivoへの応用

Research Project

Project/Area Number	08877155
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	伊藤裕京都大学, 医学研究科, 助手 (40252457)
Keywords	TGF-β / リボザイム / アデノウィルス / アンチセンス / cGMP / 血管平滑筋細胞 / トランスジェニックマウス / Gキナーゼ
Research Abstract	1.TGF-βは、アンジオテンシンII等血管作動性ペプチドにより遺伝子発現が制御され、それら血管作動性ペプチドの血管平滑筋細胞増殖調節に関与する。TGF-βのmRNAに対する2種類の1本鎖ハンマーヘッド型リボザイムを構築し、更に、通商産業省工業技術院多比良博士との共同研究により得た、リボザイム大量発現ベクター(細胞質内での分解を防ぐため細胞内で安定であるtransfer RNA構造の中にリボザイムを組み込む)に組み換え、これを用いてin vitroでTGF-βmRNAを高率に切断させることに成功した。 2.我々が報告した新しい内皮由来血管弛緩ペプチドであるC型ナトリウム利尿ペプチド(CNP)cDNAをアデノウィルスに組み込み培養血管平滑筋細胞(VSMC)に感染させCNPを過剰発現させることで、cGMPカスケードが活性化されVSMCがG1期増殖抑制を受けることを明らかにした。更に、ラビット大腿動脈にCNP遺伝子組み換えアデノウィルスを感染させ、生体血管壁へCNP遺伝子を導入することにより、バルーンカテーテルを用いた血管壁損傷後の新生内膜増殖が著明に抑制されることを明らかにした。 3.CNP過剰発現によるcGMPカスケードの活性化により、新しい心血管系特異的ホメオボックス遺伝子であるGax(Growth Arrest-specific Homeobox)遺伝子が活性化されることを明らかにした。更に、Gax mRNAに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを作成し、培養VSMCにtransfectionさせることにより、Gaxの遺伝子発現を特異的に抑制すると、cGMPカスケードによるVSMC増殖抑制がほぼ完全にブロックされることを明らかにした。 4.cGMPカスケードによる細胞増殖抑制作用のメディエーターであるヒトcGMP依存性プロティンキナーゼ(Gキナーゼ)タイプI α cDNA全長のクローニングに成功した。更に、Gキナーゼ大量発現ベクターを構築し、細胞増殖抑制効果を確認した。更に、Gキナーゼ過剰発現トランスジェニックマウスを開発中である。 5.現在、2-4で得た知見をもとに、1で得たリボザイムに関する実験手技をもとに、CNP、Gキナーゼ及びGax mRNAに対するリボザイムを構築し、テトラサイクリン誘導型ベクターへ組み込みそのVSMC増殖に対する効果を検討中である。更に、4で得た発生工学的手法をもとに、テトラサイクリン誘導発現システムを用いたcGMPカスケード遺伝子の"knock down"マウスの開発を計画している。

Research Products
(21 results)

All Other

All Publications (21 results)

[Publications] T.Ikeda,et al.: "Natriuretic peptide receptors in human arterial and venous coronary bypass vessels and rabbit vein grafts." Hypertension. 27. 833-837 (1996)
[Publications] K.Doi,et al.: "Vascular endothelial growth factor suppresses C-type natriuretic peptide secretion." Hypertension. 27. 811-815 (1996)
[Publications] N.Tamura,et al.: "cDNA cloning and gene expression of human type I alpha cGMP-dependent protein kinase." Hypertension. 27. 552-557 (1996)
[Publications] Y.Komatsu,et al.: "Regulation of endothelial production of C-type natriuretic peptide in coculture with vascular smooth muscle cells--The role of vascular natriuretic peptide system in vascular growth inhibition" Circ.Res.78. 606-614 (1996)
[Publications] Y.Komatsu,et al.: "Regulation of secretion and clearance of C-type natriuretic peptide in the interaction of vascular endothelial cells and smooth muscle cells." J.Hypertens.14. 585-592 (1996)
[Publications] Y.Miyamoto,et al.: "Alternative RNA splicing of human endothelin-A receptor generates multiple transcripts." Biochemical J.313. 795-801 (1996)
[Publications] T.Igaki,et al.: "C-type natriuretic peptide in chronic renal failure and its action in humans." Kidney Int.49 Suppl 55. S144-S147 (1996)
[Publications] T.Igaki,et al.: "Inslin suppresses endothelial secretion of C-type natriuretic peptide,a novel endotheliumderived relaxing peptide." Diabetes. 45 Suppl 3. S62-S64 (1996)
[Publications] K.Takaya,et al.: "The RET proto-oncogene in sporadic pheochromocytomas." Internal Medicine. 35. 449-452 (1996)
[Publications] M.Suda,et al.: "C-type natriuretic peptide as an autocrine/paracrine regulator of osteoblast." Biochem.Biophys.Res.Commun.223. 1-6 (1996)
[Publications] R.Iwata,et al.: "Sensitive chemiluminescent enzyme immunoassay for determination of endothelin-1." Jpn.J.Clin.Chem.25. 91-96 (1996)
[Publications] R.Iwata,et al.: "Direct determination of plasma endothelin-1 by chemiluminescence enzyme immunoassay." Clin.Chem.48. 1155-1158 (1996)
[Publications] K.Nakao,et al.: "The natriuretic peptide family." Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.5. 4-11 (1996)
[Publications] N.Tamura,et al.: "Two cardiac natriuretic peptide genes(atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide)are organized in tandem in the mouse and human genomes." J.Mol.Cell.Cardiol.28. 1811-1815 (1996)
[Publications] T.Matsumoto,et al.: "Type 2 angiotensin II receptor is expressed in human myometrium and uterine leiomyoma and is down-regulated during pregnancy." J.Clin.Endocrinol.Metab.81. 4366-4372 (1996)
[Publications] K.Takaya,et al.: "Expression of the RET proto-oncogene in normal human tissues,pheochromocytomas,and other tumors of neural crest origin." J.Mol.Med.74. 617-621 (1996)
[Publications] T.Naruko,et al.: "C-type natriuretic peptide in human coronary atherosclerotic lesions." Circulation. 94. 3103-3108 (1996)
[Publications] J.Yamashita,et al.: "Opposite regulation of Gax homeobox expression by angiotensin II and C-type natriuretic peptide." Hyertension. 29 part 2. 381-387 (1997)
[Publications] T-H.Chun,et al.: "Shear stress augments expression of C-type natriuretic peptide and adrenomedullin." Hyertension. (in press). (1997)
[Publications] T.Ikeda,et al.: "The plasma levels of brain and atrial natriuretic peptides elevate in proportion to the left ventricular end-systolic wall stress in patients with aortic stenosis." American Heart J.(in press). (1997)
[Publications] 伏見尚子編(全泰和他): "「糖尿病大血管障害シンポジウム第5巻」" 糖尿病大血管障害研究会, 264(197-206) (1996)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

リボザイムを用いた血管作動性ペプチド遺伝子"knock down"マウスの開発-テトラサイクリン誘導遺伝子発現システムのin vivoへの応用

Principal Investigator

伊藤 裕 京都大学, 医学研究科, 助手 (40252457)

Research Products

[Publications] T.Ikeda,et al.: "Natriuretic peptide receptors in human arterial and venous coronary bypass vessels and rabbit vein grafts." Hypertension. 27. 833-837 (1996)

[Publications] K.Doi,et al.: "Vascular endothelial growth factor suppresses C-type natriuretic peptide secretion." Hypertension. 27. 811-815 (1996)

[Publications] N.Tamura,et al.: "cDNA cloning and gene expression of human type I alpha cGMP-dependent protein kinase." Hypertension. 27. 552-557 (1996)

[Publications] Y.Komatsu,et al.: "Regulation of endothelial production of C-type natriuretic peptide in coculture with vascular smooth muscle cells--The role of vascular natriuretic peptide system in vascular growth inhibition" Circ.Res.78. 606-614 (1996)

[Publications] Y.Komatsu,et al.: "Regulation of secretion and clearance of C-type natriuretic peptide in the interaction of vascular endothelial cells and smooth muscle cells." J.Hypertens.14. 585-592 (1996)

[Publications] Y.Miyamoto,et al.: "Alternative RNA splicing of human endothelin-A receptor generates multiple transcripts." Biochemical J.313. 795-801 (1996)

[Publications] T.Igaki,et al.: "C-type natriuretic peptide in chronic renal failure and its action in humans." Kidney Int.49 Suppl 55. S144-S147 (1996)

[Publications] T.Igaki,et al.: "Inslin suppresses endothelial secretion of C-type natriuretic peptide,a novel endotheliumderived relaxing peptide." Diabetes. 45 Suppl 3. S62-S64 (1996)

[Publications] K.Takaya,et al.: "The RET proto-oncogene in sporadic pheochromocytomas." Internal Medicine. 35. 449-452 (1996)

[Publications] M.Suda,et al.: "C-type natriuretic peptide as an autocrine/paracrine regulator of osteoblast." Biochem.Biophys.Res.Commun.223. 1-6 (1996)

[Publications] R.Iwata,et al.: "Sensitive chemiluminescent enzyme immunoassay for determination of endothelin-1." Jpn.J.Clin.Chem.25. 91-96 (1996)

[Publications] R.Iwata,et al.: "Direct determination of plasma endothelin-1 by chemiluminescence enzyme immunoassay." Clin.Chem.48. 1155-1158 (1996)

[Publications] K.Nakao,et al.: "The natriuretic peptide family." Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.5. 4-11 (1996)

[Publications] N.Tamura,et al.: "Two cardiac natriuretic peptide genes(atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide)are organized in tandem in the mouse and human genomes." J.Mol.Cell.Cardiol.28. 1811-1815 (1996)

[Publications] T.Matsumoto,et al.: "Type 2 angiotensin II receptor is expressed in human myometrium and uterine leiomyoma and is down-regulated during pregnancy." J.Clin.Endocrinol.Metab.81. 4366-4372 (1996)

[Publications] K.Takaya,et al.: "Expression of the RET proto-oncogene in normal human tissues,pheochromocytomas,and other tumors of neural crest origin." J.Mol.Med.74. 617-621 (1996)

[Publications] T.Naruko,et al.: "C-type natriuretic peptide in human coronary atherosclerotic lesions." Circulation. 94. 3103-3108 (1996)

[Publications] J.Yamashita,et al.: "Opposite regulation of Gax homeobox expression by angiotensin II and C-type natriuretic peptide." Hyertension. 29 part 2. 381-387 (1997)

[Publications] T-H.Chun,et al.: "Shear stress augments expression of C-type natriuretic peptide and adrenomedullin." Hyertension. (in press). (1997)

[Publications] T.Ikeda,et al.: "The plasma levels of brain and atrial natriuretic peptides elevate in proportion to the left ventricular end-systolic wall stress in patients with aortic stenosis." American Heart J.(in press). (1997)

[Publications] 伏見尚子編(全 泰和 他): "「糖尿病大血管障害シンポジウム第5巻」" 糖尿病大血管障害研究会, 264(197-206) (1996)

伊藤裕京都大学, 医学研究科, 助手 (40252457)

[Publications] 伏見尚子編(全泰和他): "「糖尿病大血管障害シンポジウム第5巻」" 糖尿病大血管障害研究会, 264(197-206) (1996)