1996 Fiscal Year Annual Research Report
アポトーシス誘導分子の制御による特異的免疫抑制療法の開発
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08877195
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
中嶋 啓雄 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (70275212)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡 隆宏 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (60079837)
吉村 了勇 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (00191643)
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| Keywords | アポトーシス / 臓器移植 / 免疫抑制 / Fas antigen(=CD95) / Fas-ligand(=CD95L) / パ-フォリン / グランザイム / ICE(=IL-I converting enzyne) |
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| Research Abstract |
A)ICEとApopainに対する合成ペブチドインヒビターの開発:ICEとApopainに対してそれぞれ以下の2種類のinhibitorを使用し、Fas-induced cell deathに対する抑制効果、および低細胞毒性の面から1種類を選択した。ICE-inhibitorsとして(A:Ac-YVAD-H, B : VAD-FK)を,Apopain-inhibitorsとして(C : Ac-DEVD-H, D : Z-DEVD-FK)を用いた。^<51>CrラベルしたFas-transfectantsをA, B, C, Dのそれぞれで前処置(100μM,1hr)して、そこに抗Fas抗体(500ng/ml)を加えて、それぞれの細胞毒性、抑制効果を検討した。前処置による細胞毒性(%)/抑制率(%)は以下の結果を得た。A:19%/60.8%,B:3%/90.8%,C:14.6%/73.2%,D:2.8%/93.8%。この結果より、細胞毒性、抑制効果のいずれの面からも、FK(fluoromethylketone)の誘導体が優れていることが証明され、以後の研究ではICEに対してB : VAD-FKを、Apopainに対してD : Z-DEVD-FKを使用した。
B)GBMA(GranzymeB-Mediated Apoptosis)およびFMA(FasL/Fas-Mediated Apoptosis)に対するインヒビターの抑制活性の検討:(B-1)GBMAに対する抑制効果:^<51>Crと^<125>I-UDRでラベルしたL1210/Fasを標的細胞として用い、これにB(VAD-FK)とD(Z-DEVD-FK)を添加して1時間、前処置した。この標的細胞にRBL-cy-gzb(=perforinとgranzymeBのtransfectants)をeffector細胞として作用させ、その抑制効果を解析した。膜障害(^<51>Cr)はcontrolに対してBで45.6%,Dで53.8%抑制された。DNA傷害^<125>I-UDR)はBで85.8%,Dで94.5%抑制された。(B-2)FMAに対する抑制効果:L1210/Fasを(B-1)と同様に前処置し、そこにFasLのみを発現するeffector細胞、D11S-hybridomaを作用させ、inhibitorの抑制効果を検討した。膜障害(^<51>Cr)はcontrolに対してBで58.5%,Dで73.8%抑制された。DNA傷害^<125>I-UDR)はBで96.8%,Dで98.9%抑制された。
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[Publications] 中嶋啓雄,岡隆宏: "臓器移植とアポトーシス" 外科治療. 7613号. 304-310 (1997)
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[Publications] Hiroo Nakajima et al.: "The Inhibition of T-Cell-Receptor Induced Fas Ligand Upregulation by Cs A and FKs" 「Transplantation Proceedings」. Vol28/No2. 1052-1055 (1996)
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[Publications] Hiroo Nakajima et al.: "Analysis of Biochemical and Biological Functions of FasL and Fas on Activated T Cells" Transplantation Proceedings. Vol29/No2. 981-987 (1996)
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[Publications] 中嶋啓雄,他: "Granzymes, Fas-ligand and Apoptosis" 感染・炎症・免疫. 25/4号. 14-21 (1995)
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[Publications] 中嶋啓雄,他: "CTLによるアポトーシス誘導メカニズム" 臨床免疫. 28/1号. 127-133 (1996)
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[Publications] 中嶋啓雄,他: "CTLによる2つのアポトーシス誘導機構" 医学のあゆみ. Vol176/No12. 753-756 (1996)
