肺癌患者の循環血液中における超微量癌細胞の検出系の確立

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08877216
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 杉尾 賢二 九州大学, 医学部, 助手 (70235927)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 牛島 千衣 九州大学, 医学部, 医員 ; 塚本 修一 九州歯科大学, 歯学部, 助手 ; 坂田 敬 九州歯科大学, 歯学部, 助手
• Keywords: 肺癌 / 微小転移 / サイトケラチン / がん遺伝子 / がん抑制遺伝子 / 遺伝子診断 / ras / 骨髄

Research Abstract

1.抗サイトケラチン(CK)抗体による免疫組織学的微小リンパ節転移診断
リンパ節転移陰性とされた第I期肺癌症例のリンパ節を抗サイトケラチン(CK2)抗体にて免疫組織化学的に検討したところ、約70%にCK染色陽性細胞を認めた。CK陰性症例の再発率が8%に対し、CK陽性症例では39%と高率であり、微小リンパ節転移の検出が、再発の指標として有用であることが示唆された。
2.血液中の微量癌細胞の検出
本年度までに、原発性肺癌切除症例76例を対象とし、術前に末梢血、骨髄液、術中に肺静脈血を採取し、各々より有核球を比重分離法にて分離した。これらの検体を対象に、抗サイトケラチン抗体(CK2)を一次抗体に用いて、免疫組織化学的(APAAP法)にCK陽性細胞の検出を行った。骨髄中には76例中40例(52.6%)にCK陽性細胞を認めた。末梢血中には4例(5.3%)に、肺静脈血中には3例(3.9%)にCK陽性細胞を認め、ともに全例が骨髄陽性例であった。絶対的非治癒切除を除いた72例での予後の検討では、観察期間5〜21ケ月において骨髄の陽性例36例中血行性再発を認めた例は7例(19.4%)で、陰性例では36例中2例(5.6%)であった。
3.遺伝子変異の解析
極めて微量の細胞からK-ras遺伝子変異を検出する系を、mismatched primerを用いたPCR-based designed RFLP法を基礎にenriched PCR法をすでに確立しており、正常細胞中の超微量癌細胞の検出を少なくとも1:10^4の比率で検出できることを確認した。さらに、骨髄液中の微量癌細胞を、特異的により高感度に検出するため、抗サイトケラチン抗体でラベルしたImmunomagnetic beadsを用いて、選択的にCK陽性細胞を選別し、enriched PCR法を用いて遺伝子変異の解析の予定である。

Research Products

• [Publications] Maruyama R,et al.: "Relationship between early recurrence and micrometastases in the lymph nodes of patients with stage I non-small-cell lung cancer." Journal of Thoracic and Cardivascular Surgery. 114. 535-543 (1997)
• [Publications] Ogami A,et al: "Micrometastatic tumor cells in the bone marrow of patients with non-small cell lung cancer." Annals of Thoracic Surgery. 64. 363-367 (1997)
• [Publications] Dobashi K,et al.: "Micrometastatic p53-positive cells in the lymph nodes of non-small-cell lung cancer:prognostic significance." Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 114. 339-346 (1997)
• [Publications] 杉尾賢二: "顕微鏡切片からのPCR" 実験医学. 15. 706-710 (1997)
• [Publications] 杉尾賢二: "肺がんにおける微小転移診断" 最新医学. 52. 2667-2673 (1997)