子宮体癌細胞株におけるEGF系およびエストロゲン系の細胞内情報伝達のクロストーク

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08877256
• Research Institution: Teikyo University
• Principal Investigator: 坂本 隆子 帝京大学, 医学部, 助手 (80196089)
• Keywords: 子宮内膜癌 / EGF / エストロゲン / 細胞内情報伝達 / クロストーク

Research Abstract

子宮体癌細胞においてEGF系とエストロゲン系の細胞内情報伝達系の間にクロストークの存在するか否かを、ER強制発現細胞株を用いて検討した。プロモーターおよびネオマイシン耐性遺伝子とエストロゲンレセプター(ER)遺伝子をライゲーションさせて作成したER発現プラスミドを、子宮体癌細胞株IK株に遺伝子導入し、ネオマイシン存在下で培養することにより、ER強制発現細胞株(IK/ER株)を樹立した。IK/ER株のER発現をWestern blot法およびRT-PCR法にて検討したところ、ベクターのみを遺伝子導入したIK/mock株と比べ、ER発現の増加を認めた。両細胞株におけるEGFまたはエストロゲン刺激時のコロニー形成能を軟寒天培養法により検討したところ、IK/mock株ではEGFまたはエストロゲン刺激によりコロニー形成能の上昇を認め、EGFとエストロゲンの間には相加作用が見られた。IK/ER株においてはIK/mock株に比べコロニー形成能の上昇を認めた。またEGFに対する反応性は増加していたが、エストロゲンに対する反応性は失われていた。今後は、IK/mock株とIK/ER株を用いてEGFまたはエストロゲン刺激時のEREの転写活性をルシフェラーゼアッセイ法で、EGFレセプターのリン酸化を免疫沈降法で、またMAPキナーゼのリン酸化をWestern blot法を用いて検討することにより、EGF系とエストロゲン系のクロストークの存在の有無を明らかにしていく予定である。