タイレリア原虫のゲノム解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09044199
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 杉本 千尋 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (90231373)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): VISHNASH Nen 国際家畜研究所, 研究員 ; RICHARD Bish 国際家畜研究所, 研究員 ; SUBHASH Morz 国際家畜研究所, 研究員 ; 大橋 和彦 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助手 (90250498) ; 小沼 操 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (70109510)
• Keywords: ゲノム解析 / タイレリア / BACライブラリー

Research Abstract

Theileria parvaについてはBACクローンを作製し、その整列クローンを得る目的で、いつかの遺伝子に特異的なプライマーによるPCRによって、その遺伝子を含むBACクローンを特定した。cDNAライブラリーの挿入断片の塩基配列を解析した。北大側で約200クローン、国際家畜研究所側で約600クローン塩基配列を決定し、BLASTSEARCHにより既知遺伝子配列との相同性を解析した。合計800クローン中、明らかに宿主(牛)由来配列と思われる遺伝子、既知のハウスキーピング遺伝子と相同性の高い原虫遺伝子、ユニークな原虫由来cDNAに分類された。これらの一部は染色体上にマツピングし、Expressed sequence tag(EST)としての有用性が確認された。
T.sergentiについては染色体が4本であること、各染色体サイズとゲノムサイズ(約10Mb)とT.parvaのそれと一致することを確認した。さらにいくつかのハウスキーピング遺伝子や相同遺伝子を各染色体上にマッピングしたところ、一部遺伝子では両種の原虫間ではシンテニーが保存されておらず、染色体構造が一部異なっていることが示唆された。T.sergentiについては、システインプロテアーゼ、ピロプラズマ表面蛋白質(p23)の各遺伝子を新たにクローニングし、池田/千歳株間での多様性を明らかにした。またピロプラズマ主要表面蛋白質遺伝子(p32)が本ステージだけでなくダニ体内のスポロゾイトステージにも発現されていることを確認した。p32については東アジア(タイ、ベトナム)、米国分離株の塩基配列解析を新たに行い、これらが既知の良性タイレリア群原虫とは遺伝的に異なった群であることとを明らかにした。

Research Products

• [Publications] Kawazu,S: "Phylogenetic relationships of the binign Theileria species in cattle ans Asian buffalo based on the major piroplasm surface protein(p33-34)gene sequence." International Journal for Parasitology. (In Press). (1999)
• [Publications] Sako,Y,et al.: "Molecular cloning and characterization of 23 kDa piroplasm surface proteins of Theileria sergenti and T.buffeli" Journal of Protozoology Reaserch. (In Press). (1999)
• [Publications] Sako.Y.et al.: "Expression of a major piroplasm surface of Theileria sergenti in sporozoite stage." Journal of Veterinary Medical Science. (In Press). (1999)
• [Publications] Sako,Y.,et al.: "Molecular cloning of a cysteine protease gene of Theileria sergenti." Journal of Veterinary Medical Science. (In Press). (1999)
• [Publications] Kakuda T,et al.: "Phylogeny of benign Theileria species isolated from cattle in Thailand,China and USA based on the major piroplasm surface protein and small subunit ribosomal RNA genes" International Jouranl for Parasitology. 28. 1261-1267 (1998)
• [Publications] Iwasaki,T.: "Differentiation and quantification of Theileria sergenti piroplasm types using type-specific monoclonal antibodies." Journal of Veterinary Medical Science. 60. 665-669 (1998)
• [Publications] Nene,V.,et al.: "Organization and informational cntent of Theilleria parva genome." Molecular and Biochemical Parasitology. 95. 1-8 (1998)