1997 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子破壊法によるIV型コラーゲンの機能解析に関する共同研究

Research Project

Project/Area Number	09044308
Research Institution	Okayama University
Principal Investigator	二宮善文岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	ブラケブッシュコードマッスクプランク研究所, 生化学, 研究員アゾディアティラマックスプランク研究所, 生化学, 研究員百田龍輔岡山大学, 医学部, 助手 (80263557) 大橋俊孝岡山大学, 医学部, 助手 (50194262) フェスラーラインハルトマックスプランク研究所, 生化学, 教授
Keywords	コラーゲン遺伝子 / COL4A6 / 平滑筋腫 / 基底膜 / ノックアウト
Research Abstract	私共は基底膜マトリックス構築の中のα6(IV)鎖の生物学的機能を解明することを目的として、単離したマウスCo14a6遺伝子を遺伝子破壊法で発現停止させることによって出現するマウスの形質変化を追跡することを試みた。Co14a6遺伝子中にNeo^R外来遺伝子挿入した異常Co14a6遺伝子コンストラクトをES細胞にエレクトロポレーションを行い、目的コンストラクトが相同組み換えによって入ったESクローンを得た。 ES細胞をC57BL/6マウスの胚盤胞に注入し、ICR仮親にキメラ胚を移入し、キメラマウスを作成することができた。キメラマウスが生まれ、交配をくり返すことにより、ホモ接合体を得ることができた。この間、胸空内出血、消化管出血、血腫を呈して死亡するマウスが存在した。これらの変化がCo14a6遺伝子が欠失することによる形質変化であるのか、もしくは環境変化や自然の対応なのかを見極める必要がある。一方で、Co14a6遺伝子の発現部位を克明に観察すると、消化管や血管周囲の基底膜に発現するが比較的管空圧の高い部位に集中して発現が高揚している傾向があることが判明した。また、ヒトの例で食道下部平滑筋腫を伴うアルポート症候群が存在し、この例の詳細な遺伝子解析を行うとCOL4A5とCOL4A6遺伝子の上流部が大きく欠失していることが判明した。アルポート症候群の原因遺伝子がCOL4A5遺伝子であることが明らかであるため、COL4A6遺伝子の欠失が食道下部平滑筋腫をひきおこす可能性がある。現在、食道、気管支、血管、子宮等の平滑筋周囲の基底膜を中心に解析を進めている。

Research Products
(14 results)

All Other

All Publications (14 results)

[Publications] Megumi Kagawa et al.: "Epitope-defined monoclonal antibodies against type-IV collagen for diagnosis of Alport's syndrome." Nephrol.Dial.Transplant.12. 1238-1241 (1997)
[Publications] Sado Y et al.: "Purification and characterization of human nephrito genic antigen that induces anti-GBM nephritis in rats." J.Pathol.182. 225-232 (1997)
[Publications] Heidet L et al.: "Diffuse leiomyomatosis associated with X-linked Alport syndrome:extracellular matrix study using immunohistochemisutry and in situ hybridizatin." Lab.Invest.76(2). 233-243 (1997)
[Publications] Tanaka K et al.: "Differential expression of α1(IV),α2(IV),α5(IV),α6(IV) collagen chains in the basement membrane of basal cell carcinoma." Histochem.J.29. 563-570 (1997)
[Publications] Fleischmajer R et al.: "There is temporal and spatial expression of α1(IV),α2(IV),α5(IV),α6(IV) collagen chains and b integrins during the development of the basal lamina in an "in vitro"skin model." J.Invest.Dermatol.109(4). 527-533 (1997)
[Publications] Olson M.W.et al.: "High affinity binding of Matrix metalloproteinase-9 to the pro-α2 (IV) chain of collagen IV.Role in binding of zymogen to the surface of human breast epthelial MCF10A cells." J.Biol.Chem.(in press). (1998)
[Publications] Yoshikazu Sado et al.: "Induction of anti-GBM nephritis in rats by recombinant α3(IV) and α4(IV)NC1 of type IV collagen." Kidney International. (in press). (1998)
[Publications] Ueki Y et al.: "Topoisomerase I and II consensus sequences in a 17-kb deletion junction of the COL4A5 and COL4A6 genes and immunohistochemical analysis of esophageal leiomyomatosis associated with Alport syndrome." Am.J.Hum.Genet.(in press). (1998)
[Publications] Gunwar S.et al.: "Glomerular Basement Membrane:Identification of a novel disulfide-crosslinked network of α3,α4 and α5 chains of type IV collagen and its implications for the pathogenesis of Alport syndrome." J.Biol.Chem.(in press). (1998)
[Publications] Heidet, L.et al.: "Somatic deletion of the 5'ends of both the COL4A5 and COL4A6 genes in a sporadic leiomyoma of the esophagus." AmJ.Pathol.(in press). (1998)
[Publications] Glew R.H.& Ninomiya Y.: "Clinical Studies in Medical Biochemistry" Oxford University Press New York, 496 (1997)
[Publications] Tryggvason K: "Alport Syndrome (Hereditary nephritis) in Clinical Studies in Medical Biochemistry" Oxford University Press, New York, 496 (1997)
[Publications] Yoshikazu Sado et al.: "Expression of collagen IV genes and Goodpasture syndrome." ECM-Cell Interaction(in press),
[Publications] Olsen B.R.& Ninomiya Y.: "Collagens In:Guide book to the extracellular matrix and adhesion proteins" Boca Raton FL,CRC Press(in press), (1997)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子破壊法によるIV型コラーゲンの機能解析に関する共同研究

Principal Investigator

二宮 善文 岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)

Research Products

[Publications] Megumi Kagawa et al.: "Epitope-defined monoclonal antibodies against type-IV collagen for diagnosis of Alport's syndrome." Nephrol.Dial.Transplant.12. 1238-1241 (1997)

[Publications] Sado Y et al.: "Purification and characterization of human nephrito genic antigen that induces anti-GBM nephritis in rats." J.Pathol.182. 225-232 (1997)

[Publications] Heidet L et al.: "Diffuse leiomyomatosis associated with X-linked Alport syndrome:extracellular matrix study using immunohistochemisutry and in situ hybridizatin." Lab.Invest.76(2). 233-243 (1997)

[Publications] Tanaka K et al.: "Differential expression of α1(IV),α2(IV),α5(IV),α6(IV) collagen chains in the basement membrane of basal cell carcinoma." Histochem.J.29. 563-570 (1997)

[Publications] Fleischmajer R et al.: "There is temporal and spatial expression of α1(IV),α2(IV),α5(IV),α6(IV) collagen chains and b integrins during the development of the basal lamina in an "in vitro"skin model." J.Invest.Dermatol.109(4). 527-533 (1997)

[Publications] Olson M.W.et al.: "High affinity binding of Matrix metalloproteinase-9 to the pro-α2 (IV) chain of collagen IV.Role in binding of zymogen to the surface of human breast epthelial MCF10A cells." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

[Publications] Yoshikazu Sado et al.: "Induction of anti-GBM nephritis in rats by recombinant α3(IV) and α4(IV)NC1 of type IV collagen." Kidney International. (in press). (1998)

[Publications] Ueki Y et al.: "Topoisomerase I and II consensus sequences in a 17-kb deletion junction of the COL4A5 and COL4A6 genes and immunohistochemical analysis of esophageal leiomyomatosis associated with Alport syndrome." Am.J.Hum.Genet.(in press). (1998)

[Publications] Gunwar S.et al.: "Glomerular Basement Membrane:Identification of a novel disulfide-crosslinked network of α3,α4 and α5 chains of type IV collagen and its implications for the pathogenesis of Alport syndrome." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

[Publications] Heidet, L.et al.: "Somatic deletion of the 5'ends of both the COL4A5 and COL4A6 genes in a sporadic leiomyoma of the esophagus." AmJ.Pathol.(in press). (1998)

[Publications] Glew R.H.& Ninomiya Y.: "Clinical Studies in Medical Biochemistry" Oxford University Press New York, 496 (1997)

[Publications] Tryggvason K: "Alport Syndrome (Hereditary nephritis) in Clinical Studies in Medical Biochemistry" Oxford University Press, New York, 496 (1997)

[Publications] Yoshikazu Sado et al.: "Expression of collagen IV genes and Goodpasture syndrome." ECM-Cell Interaction(in press),

[Publications] Olsen B.R.& Ninomiya Y.: "Collagens In:Guide book to the extracellular matrix and adhesion proteins" Boca Raton FL,CRC Press(in press), (1997)

二宮善文岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)