遺伝子破壊法によるIV型コラーゲンの機能解析に関する共同研究

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09044308
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 二宮 善文 岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 百田 龍輔 岡山大学, 医学部, 助手 (80263557) ; 大橋 俊孝 岡山大学, 医学部, 講師 (50194262)
• Keywords: IV型コラーゲン / 基底膜 / ノックアウトマウス / アルポート症候群 / び慢性食道平滑筋症 / 平滑筋細胞

Research Abstract

1) α6(IV)ノックアウトマウスのへテロ接合体およびホモ接合体を得ることができた。これらのマウスにおいてα6(IV)鎖遺伝子のRNA転写とタンパク翻訳活性があるかどうかについて種々の臓器について詳細に検索した。その結果、α6(IV)遺伝子は転写産物は認められず、α6(IV)ポリペプチドについても特異的抗体も用いて免疫染色をおこなったところ陰性であった。このことは遺伝子発現停止実験が成功したことを意味する。ところが、面白いことに、α5/α5/α6分子を構成しているもう一つのα5(IV)遺伝子は、転写産物はあるが、α6(IV)ポリペプチドは、α3/α4/α5として存在っしている組織では陽性であるが、α5/α5/α6で構成されている組織では陰性であった。このことは、α6(IV)が発限停止されるとα5(IV)ポリペプチドも細胞内で分解されることを示唆している。
2) び慢性平滑筋腫の病因を明かにする目的で、ヒトび慢性食道平滑筋症+アルポート症候群合併例のYACコンストラクト(Col4a6とCol4a5上流部位が欠失)をマウスに遺伝子導入し、トランスジェニックマウスを得ることに成功した。
3) び慢性平滑筋腫の病因を明かにする目的で、日本で初めてのアルポート症候群+び慢性平滑筋腫のCol4a6-Col4a5変異部位を詳細に配列決定した。今までの報告のなかで最も短い17kbの欠失がα6(IV)とα6(IV)遺伝子の上流域で認められた。欠失境界領域では、トポイソメラーゼIおよびIIのコンセンサス配列、6bp directrepeat、周囲領域にL1およびAlu反復配列が認められた。これらは大きな欠失の修復に関与したことが推定された。

Research Products

• [Publications] Ueki Y.et al: "Topoisomerase I and II consensus seguencesina 19-kb deletionjunction of the COL4A5 and COL4A6 gones and immexthutochemical analyesis of EL associrtel AS." Am.J.Hum.Genet.62. 253-261 (1998)
• [Publications] HeidetL.et al: "Somatic deletion of the 5'ends of both COL4A5 and COL4A6 genes in a sporadic leiomyoma of the esayhagus." Am.J.Pathol.152. 673-678 (1998)
• [Publications] Momota R.et al: "Twogenes, COL4A3 and COL4A4 coding for the human α_3(IV)and α_4(IV)collagen chains are arranged head-to-headonchiomosom 2q36." FEBS Lett.424. 11-16 (1998)
• [Publications] Fleischmajer Retal: "Initiation of skin basement membrane formation at the epiderno-dermal interface involoes assembly of laminins thuojhbiuding to all suface receptors" J.Cell Sci.111. 1929-1940 (1998)
• [Publications] Seki T.et al: "Differential expression of type IV callagen isofomis, α_5(IV)and α_6(IV) chanis, in basement membraues sarrounding smooth mascle cells." Histochem Cell Biol. 110. 359-366 (1998)
• [Publications] Sado Y.et al: "Organization and expression of basement menbrane csllagen IV genes and theirsoles in human disordes." J.Biochem(Tokyo). 123. 767-776 (1998)
• [Publications] Olsen RB and Ninomiya Y.: "Gisde book to the extracellular matrix and adhesionprotion" CRC Press(in press), (1998)
• [Publications] Ninomiya Y et al: "Extiacellalar Matrirn-Cell Interaction" Karger, 382 (1998)