1997 Fiscal Year Annual Research Report
ポリメラーゼによるヌクレオシドアナログの取り込と突然変異
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09044309
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
早津 彦哉 岡山大学, 薬学部, 教授 (10012593)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
WILLIAMS Dav シェフィールド大学, 化学科, デモンストレーター
LOAKES David 医学研究機構, 分子生物学研究部(英国), 研究員
BROWN Daniel 医学研究機構, 分子生物学研究部(英国), 特別研究職
島本 整 広島大学, 生物生産学部, 助教授 (90187443)
根岸 和雄 岡山大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (70116490)
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| Keywords | P-ヌクレオシド / 突然変異 / ヌクレオシドアナログ / DNAポリメラーゼ / エイズウイルス / ニッケル / 取り込みミス / 逆転写酵素 |
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| Research Abstract |
P-ヌクレオシドのデオキシ体(dP)に関し、ニッケルイオンの影響について研究を行った。まず、変異に対する影響を調べたところ、GC-to-AT変異を選択的に阻害することがわかった。逆のAT-to-GC変異はむしろ弱く促進的であり、阻害作用は認められなかった。この影響は、DNAポリメラーゼによる取りこみへの影響によるのではないかと考え、大腸菌DNAポリメラーゼllarge fragmentを用いて、dPのトリリン酸体(dPTP)の取り込みへのニッケルイオンの影響を検討した。その結果、ニッケルイオンは一般にDNA合成の速度を遅くするが、鋳型G上のdPTPの取り込みをdCTPの取り込みより強く阻害することがわかった。一方、鋳型A上の取り込みはPでもTでも変わらなかった。さらに、鋳型P上の取り込みはGとCとの間で差がなかった。以上の現象が、大腸菌内のDNA複製でも起きていれば、ニッケルの効果を説明することができる。また、dPTPの大腸菌逆転写酵素による取り込みも検討し、よい基質となることがわかった。取り込みの詳細については現在さらに検討中である。リボ体のトリリン酸体であるrPTPについては、エイズウイルスの転写の因子であるTatたんぱく質と結合するTAR RNAに対する取り込みの実験を行った。その結果、rPTPはrUTPの替りに良く取込まれ、完全にUがPで置き変わったRNAを調整することができた。その構造はUを含むものとは多少違っているが、TATとの結合能は25%残っている。また、リボヌクレオシドrPは弱い変異原性を示すことがわかった。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Hayatsu, H.: "Polynucleotide-chitosan complex,an insoluble but reactive form of polynucleotide" Chem.Pharm.Bull.45. 1363-1368 (1997)
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[Publications] Hayatsu, H.: "Preparation of DNA-chitosan columns and their applications:binding of carcinogens to the column" Nucleic Acids Symposium Series. No.37. 139-140 (1997)
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[Publications] Negishi, K.: "Yeast oligonucleotide transformation:its mechanism and application to analysis of mutations induced by defined DNA lesions" Nucleic Acids Symposium Series. No.37. 289-290 (1997)
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[Publications] Negishi, K.: "The mechanism of mutation induction by a hydrogen bond ambivalent,bicyclic N-oxy-2'-deoxycytidine in Escherichia coli" Nucleic Acids Res.,. 25. 1548-1552 (1997)
