1997 Fiscal Year Annual Research Report
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09102007
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
丸茂 文昭 東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (00050443)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々木 成 東京医科歯科大学, 医学部, 助教授 (60170677)
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| Keywords | 膜輸送体 / 腎臓 / アクアポリン / 体液制御 / 尿濃縮 / チャネル / トランスポータ / 水・電解質 |
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| Research Abstract |
1.輸送体の調節機構の解明
蛋白レベルでの検討としては、AQP3は水チャネルのみならず、中性小分子も通過させるが、水と小分子が同一のporeを通るか否かは不明であった。水銀剤による阻害実験により両者は同一のporeを通ることが示された。さらにAQP2とAQP3のpore構造も同じであることが推測され、AQPファミリーの構造と機能の関連に示唆を得ることができた。細胞レベルでの検討としては、AQP2がvasopressinの刺激によって細胞内貯蔵部位の小胞より細胞膜表面へsortingされる現象を調べた。AQP2のC端近くに存在するA-kinaseリン酸化部位のリン酸化が引き金となって、sortingが起きることを明らかにした。輸送体蛋白の合成の調節については、核での遺伝子の転写制御についての検討を行なった。高浸透圧とcAMPによってAQP2,CIC-K1の転写が亢進することを示した。
2.輸送体の調節異常と病態の関連の明確化
腎性尿崩症、Dent病、Liddle症候群において、全国の施設の協力を得て、患者DNAの解析を行い、多くの遺伝子変異を同定した。また疾患モデルを作ることも大切であり、CIC-K1,CIC-K2,CIC-3のノックアウトマウスを作成中である。またいくつかの輸送体については、その機能が過剰になった病態を調べるため、トランスジェニックマウスを作成中である。
3.腎臓尿細管特異的発現機構の解明
尿細管セグメント特異的発現機構を明らかにするために、AQP2,CIC-K1,CIC-K2の遺伝子上流を用いて、発現、非発現の培養細胞においてin vitro reporter gene assayを行ない、臓器特異的cis elementを同定した。またこの遺伝子上流を組こんだreporter geneを導入したトランスジェニックマウスを作成中である。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Ishibashi K, Sasaki S, Fushimi K, Yamamoto T, Kawahara M, Marumo F.: "Immunolocalization and effect of dehydration on AQP3" Am.J.Physiol.272. F235-F241 (1997)
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[Publications] Sasaki S, Uchida S, Kurahara M, Fushimi K, Marumo F: "Aquaporins and ion conductance" Science. 275. 1490-1491 (1997)
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[Publications] K.Fushimi, S.Sasaki, F.Marumo: "Phosphorylation of serine 256 is required for camp-dependent regulatory exoytosis of the aquaporin-2 water channel." J.Biol.Chem.272. 14800-14804 (1997)
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[Publications] T.Rai, S.Uchida, F.Marumo, S.Sasaki: "Cloning of rat and mouse aquaporin-2 gene promoters and identification of a negative cis-regulutory element." Am.J.Physiol.273. F264-F273 (1997)
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[Publications] M.Kurahara, Y.Gu, K.Ishibashi, F.Marumo, S.Sasaki: "Mercury-sensitive residues and pore site in AQP3 water channel." Biochemistry. 36. 13973-13978 (1997)
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[Publications] K.Ishibashi, M.Kawahara, Y.Gu, Y.Kageyama, A.Tohsaka, F.Marumo, S.Sasaki: "Cloning and functional expression of a new water channel abundantly expressed in the testis permeable to water,glycerol and area." J.Biol.Chem.272. 20782-20786 (1997)
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[Publications] Sasaki S, Ishibashi K, Marumo F.: "Aquaporin-2 and -3 : Representatives of two subgroups of the aquaporin family colocalized in the kindrey collecting duct." Annu.Rev.Physiol. (in press),
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[Publications] 佐々木成, 石橋賢一, 丸茂文昭: "水チャネルと尿崩症チャネルとトランスポータ:その働きと病気 岡田泰伸・清野進編" メジカルビュー社,
