1999 Fiscal Year Annual Research Report
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09102007
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
丸茂 文昭 東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (00050443)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々木 成 東京医科歯科大学, 医学部, 助教授 (60170677)
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| Keywords | 膜輸送体 / チャネル病 / 水チャネル / クロライドチャネル / 腎臓 / 電解質異常 |
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| Research Abstract |
1)輸送体の調節機構の解明:
哺乳類の腎由来であるLLCPK1細胞にAQP2を発現させ、cAMPにより細胞内輸送が活性化され、AQP2の細胞表面への出現が増加することを観察した。さらにC末の第6膜貫通ドメインのLLモチーフが膜表面への輸送に必須であることを電顕レベルで示した。ClCに関しては、ClC-3の特異抗体が得られ、小脳ブルキンエ細胞での局在を検討中である。
2)輸送体の調節異常と病態の関連:
腎性尿崩症、Dent病の患者について全国より依頼を受けて、患者のDNAのシークエンスを行い、いくつかの新しい変異を同定した。腎性尿崩症はAQP2またはバゾプレッシン受容体遺伝子の異常で起こるが、我々は日本の腎性尿崩症の11家系を解析し、AQP2変異を4家系で認めている。AQP2異常は通常、劣性の遺伝形式をとるが、優性の形式をとる家系を3例見つけている。5家系のDent病患者で解析を行い4家系でClC-5の遺伝子異常を見つけている。Dent病の臨床症状は低分子蛋白尿症、Ca排泄増加、尿路結石、腎機能低下であり、Clチャネル異常でこのような機能異常を引き起こす機序が不明であったが、最近免疫染色により、ClC-5蛋白がH-pumpと細胞内小胞(endosome)に共存している像を認めた。
3)腎臓尿細管特異的発現機構:
腎臓の尿細管セグメントに特異的に発現しているAQP2,ClC-K1,ClC-K2の遺伝子上流を用いて、発現、非発現の培養細胞においてreporter gene assayを行ない、臓器特異的cis elementを同定を試みいくつかのエレメントを同定することができた。このエレメントに結合する転写因子2種をクローニングし、その細胞を検討している。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Matsumura, Y., et al.: "Overt nephrogenic diabetes inspidus in mice lacking the CLC-K1 chloride channel"Nature Genetics. 21. 95-98 (1999)
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[Publications] Yoshikawa, M., et al.: "Localization of CLC-K2 chloride channel mRNA in the kidney"Am. J. Physiol.. 276. F552-F558 (1999)
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[Publications] Yamauchi, K., et al.: "The expression and function of four AGP2 mutants in LCC-PK1 cells"Kidney Int.. 56. 164-171 (1999)
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[Publications] Shinbo, I., et al.: "Functional analysis of aquaporin-2 mutants associated nephrogenic diabetes insipidus by yeast expression"Am. J. Physiol.. 277. F734-F741 (1999)
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[Publications] Saito, T., et al.: "Lack of rasopressin- independent upregulation of AGP-2 gene expression in homozygous Brattleboro rats"Am. J. Physiol.. 277. R427-R433 (1999)
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[Publications] Kawasaki, M., et al.: "Identification of an acid-activated Cl channel from human skeletal muscles"Am. J. Physiol.. 277. C948-C954 (1999)
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[Publications] Sakamoto, H., et al.: "Cellular and subcellular immunolocalization of CIC-15 channel in mouse kidney : colocalization with H-ATPase"Am. J. Physiol.. 277. F957-F965 (1999)
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[Publications] Kuwahara, M., et al.: "Transmembrane Helix 5 is critical for the high water permeability of aquaporin"Biochemistry. 38. 16340-16346 (1999)
