1997 Fiscal Year Annual Research Report
血管内皮細胞のタイト結合蛋白7H6とがん細胞の血管外脱出の抑制
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09254252
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
澤田 典均 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (30154149)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森 道夫 札幌医科大学, 医学部, 教授 (00045288)
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| Keywords | タイト結合 / ZO-1 / 7H6(barmotin) / 細胞電気抵抗 / occludin |
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| Research Abstract |
1.目的
血管内皮細胞間にはタイト結合が存在し、イオンや蛋白のみならず炎症細胞や癌細胞のintra-およびextra-vasationに関与していると考えられている。したがって、タイト結合の機能(バリア機能)を調節するごとにより癌細胞の血管への出入りを制御できる可能性がある。我々が発見したタイト結合蛋白のひとつ、7H6蛋白(barmotin)の発現はバリア機能と相関するため、barmotinのcDNA発現クローニング、シークエンスを行い、barmotinの機能を明らかにすると共に、タイト結合の機能調節機構を明かにする。
2.方法と結果
タイト結合を構成する分子は、ZO-1,ZO-2,cingulin,barmotin,symplekinなどが報告されているが、タイト結合の発達した脳の毛細血管内皮細胞では、他の内皮細胞に比べてoccludinの発現が高く、occludinがタイト結合の機能や構造に重要な役割を果たしていると考えられている。そこで、ラット肺毛細血管内皮細胞(RLE)にラットoccludinを強制発現させるために、ラットoccludinをクローニングし、pEF-BOS vecterを用いてRLEに導入した。得られたtransfectantを用いてnorthern blot,western blot,免疫組織化学、免疫電顕、フリーズフラクチャー、細胞電気抵抗、分子透過性などを検討した。その結果、多量のoccludin蛋白が作られ細胞膜に局在したが、タイト結合のバリア機能(電気抵抗値、透過性)に変化は認められなかった。以上から、タイト結合機能発現には、occludinのほかに必須の因子の存在が示唆された。
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[Publications] 澤田典均 他: "細胞接着装置-タイト結合-と癌" 現代医療. (印刷中).
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[Publications] Kimura,H.et al.: "Bacterial lipopolysaccharide reduced intestinal barrier function and altered localization of 7H6 antigen in IEC-6 rat intestinal crypt cells." J.Cell.Physiol.171. 284-290 (1997)
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[Publications] Yamada-Sasamori,Y.et al.: "Rapid induction of 7H6 tight junction-associated protein and paracellular barrier function in capillary endothelial cells of porcine brain in vitro by treatment with astrocyte conditioned medium and cAMP." Med.Electr.Microsc.,. 30. 8-14 (1997)
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[Publications] Kojima,T.et al.: "Different changes in expression and function of connexin 26 and connexin 32 during DNA synthesis and redifferentiation in primary rat hepatocytes using DMSO culture system." Hepatology. 226. 585-587 (1997)
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[Publications] Ikeda,T.et al.: "Induction of tyrosine aminotransferase of primary cultured rat hepatocytes depends on the organization of microtubules." J.Cell.Physiol.(印刷中).
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[Publications] Sasaki,K.et al.,: "Difference in the expression of three tight junction proteins,barmotin,occludin and ZO-1,in phenotypically different human colon cancer cell lines." Med.Electron Microsc.(in press.).
