1997 Fiscal Year Annual Research Report
胆管側膜上有機アニオン輸送担体および関連蛋白とチャンネル機能の協関
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09257211
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
杉山 雄一 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (80090471)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 洋史 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助教授 (80206523)
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| Keywords | ABC輸送担体 / cMOAT / MRP / MLP / 胆汁排泄 / 多剤耐性 |
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| Research Abstract |
前年度科学研究費のサポートを得て、ラット胆管側膜上に存在し、グルタチオンおよびグルクロン酸抱合体を含む種々有機アニオン系化合物の胆汁排泄に関与するcanalicular multispecific organic anion transporter(cMOAT)のcDNAクローニングを完了し、cMOAT機能を遺伝的に欠損するラットEisai hyperbilirubinemic rat(EHBR)における変異機構を同定してきた。今年度は、クローン化したcDNA産物の機能を決定すると共に、cMOAT関連蛋白のcDNAクローニングに関して検討を加えた。cMOATcDNAを哺乳類発現ベクターpCXN2にsubcloningし、NIH3T3細胞にtransfectした。G418存在下で得られた安定遺伝子導入株に対しNorthern blotによりcMAOT高発現株を採取し、膜ベシクルを調製した。膜ベシクルにおけるcMOAT基質2,4-dinitrophenyl-S-glutathione(DNP-SG)の輸送を測定したところ、ATP依存性が観察されたが、GTP,CTP,UTPもATPの約50%程度の促進効果を有することが示された。更に、ATPにより促進される輸送はK_m=0.175μMの飽和性を示した。一方、vectorのみを遺伝子導入した細胞株より調製した膜ベシクルにおいてもATPにより促進されるDNP-SG輸送活性が観察されたが、Northern blotの結果からNIH3T3細胞におけるマウスcMOATの発現が確認されたことから、この輸送はマウスcMOATに依る可能性が示唆された。本研究結果は、クローン化されたcMOATcDNA産物の機能を定量的に評価した初めての例である。
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[Publications] 鈴木洋史: "異物排除におけるトランスポーターの役割:cMOATおよびMRP superfamily memberを中心として." 蛋白質核酸酵素. 42. 1273-1284 (1997)
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[Publications] X.-Y.Chu: "Multispecific organic anion transporter is responsible for the biliary excretion of the camptothecin derivative irinotecan and its metabolites in rats." J.Pharmacol.Exp.Ther.281. 304-314 (1997)
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[Publications] M.Yamazaki: "Biliary excretion of pravastatin in rats:Contribution of the excretion pathway mediated by canalicular multispecific organic anion transporter(cMOAT)" Drug Metab.Dispos.25. 1123-1129 (1997)
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[Publications] T.Yamada: "Mechanism of the tissue distribution and biliary excretion of the cyclic peptide octreotide" J.Pharmacol.Exp.Ther.279. 1357-1364 (1997)
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[Publications] X-Y.Chu: "Multiplicity of biliary excretion mechanisms for irinotecan,CPT-11,and its metabolites in rats" Cancer Res.57. 1934-1938 (1997)
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[Publications] H.-C.Shin: "Hepatobiliary transport mechanism for the cyclopentapeptide endothelin antagonist BQ-123" Am.J.Physiol.272. G979-G986 (1997)
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[Publications] K.Ito: "Functional analysis of a canalicular multispecific organic anion transporter cloned from rat liver." J.Biol.Chem.273. 1684-1688 (1998)
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[Publications] 鈴木洋史: "抗癌剤の相互作用" (医薬ジャーナル社)杉山雄一、佐々木康綱編,
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[Publications] 楠原洋之: "抗癌剤の相互作用" (医薬ジャーナル社)杉山雄一、佐々木康綱編,
