チロシンキナーゼおよびG蛋白によるHIV感染性の制御機構

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09258231
• Research Institution: Research Institute, International Medical Center of Japan
• Principal Investigator: 松田 道行 国立国際医療センター, 臨床病理研究部, 部長 (10199812)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 秀宗 国立感染症研究所, 主任研究官 (70260271)
• Keywords: HIV / Hck / Src / チロシンキナーゼ / Nef

Research Abstract

HIVの感染性をSrc型チロシンキナーゼがどのように制御するかについて研究した。まず、Src型チロシンキナーゼのうち、マクロファージに多く存在することが知られているHckのアミノ末端側半分を発現するベクターを作成し、産生される蛋白をHckNと命名した。同様の構築のSrcチロシンキナーゼは内在性のSrcに対して抑制性に働くことが知られており、優勢劣性変異体となる。HIVプロウイルスNL432とHckNを同時に発現させるとHIVの感染性が約30%に低下することを見出した。HckNのSH2ドメインに変異を入れてもこの抑制効果に変化は無かったが、SH3ドメインに変異をいれると、この抑制効果が完全に失われた。次に、どういう機序でHckNがHIVの感染性を低下させるかを調べるために、VSVのpseudotypeを作成したところ、HckNの影響はまったく認められなかった。このことは、HIVの細胞内侵入にHckNの影響があることを示唆する。そこで、HIVのT細胞に対する侵入効率を測定したところ、HckNはHIVの侵入効率を約30%に低下させていた。ウイルス上のgp120を測定したが、あきらかな差は認められなかった。また、Hckと結合することが知られているNef蛋白を欠失した変異体に対するHckNの影響を調べたが、HckNはこの変異体も野生型同様に抑制した。以上の結果は、HckNがNef非依存性にHIVのgp120を機能的に阻害することを示唆し、逆に、Src型チロシンキナーゼの活性がHIVの標的細胞への侵入に必要なことを意味しているものと思われる。

Research Products

• [Publications] Takahashi,H.et al.: "The role of topoisomerase I in HIV-1 replication." Leukemia. 11. 113-115 (1997)
• [Publications] Tokunaga,K..et al.: "Inhibition of HIV-1 virion entry by dominant negative Hck." J.Virol.(in press). (1998)