組換え受容体を用いた逆作用薬inverse agonistの検索

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09273221
• Research Institution: 福井医科大学
• Principal Investigator: 村松 郁延 福井医科大学, 医学部, 教授 (10111965)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 史子 福井医科大学, 医学部, 助手 (80291376) ; 谷口 隆信 福井医科大学, 医学部, 助教授 (60217130)
• Keywords: 逆作用薬 / α_<1a>アドレナリン受容体 / サイトセンサー / 組換え受容体

Research Abstract

受容体はagonistで刺激されなくても活性化状態を示すことがある。それは,受容体が過剰に発現した場合と,受容体それ自身がpoint mutationなどにより持続的に活性化された状態になった場合である。この活性化状態を抑制する薬物を逆作用薬inverse agonistとよび,従来の単純な競合的拮抗薬competitive antagonistと区別される。我々は本年度の研究において,inverse agonistを生理的に検索できる系の確立を試みた。実験には3種のヒトα_1アドレナリン受容体サブタイプ(α_<1a>,α_<1b>,α_<1d>)を持続的に発現したCHO細胞を用いた。受容体活性化の状態は,細胞の代謝活動を細胞外pHの微量変動として記録できるcytosensorを用いて測定した。
まず,基礎実験としてα_<1a>サブタイプ発現細胞を用い,以下の成績を得た。
1.noradrenalineなどによる受容体刺激はcytosensorを用いて濃度依存的に測定できる
2.受容体を最大刺激した時の細胞代謝亢進(pH変動)は発現している受容体密度に比例する
3.受容体が高密度に発現した細胞では,spare recptorが存在する
4.本実験系を用いてagonistをfull agonistとpartial agonistに分類できる
5.α_1サブタイプはPLCを介する情報伝達系を活性化する
6.本実験系で得られたcompetitive antagonistの拮抗様式は古典的なSchild plot解析法で解析できる
次にα_<1a>,α_<1b>またはα_<1d>サブタイプを過剰発現した細胞を用い,inverse agonistを検索した。その結果,α_<1b>サブタイプにおいてprazosin,WB4101など今までcompetitive antagonistとして考えられてきた薬物がinverse agonistとしても作用を示すことを認めた。

Research Products

• [Publications] 村松郁延: "アドレナリン受容体" 薬局. 48(1). 32-38 (1997)
• [Publications] F.Suzuki: "Cloning,functional expression and tissue distribution of rabbit α_<1d>-adrenoceptor" Biochemicaet Biophysica Acta. 1323. 6-11 (1997)
• [Publications] S.Miyamoto: "Cloning,functional expression and tissue distribution of rabbit α_<1a>-adrenoceptor" Life Sciences. 60(23). 2069-2074 (1997)
• [Publications] M.Takita: "Chronic treatment with prazosin causes a subtype-specific increase in the α_1-adrenoceptor density of the stressed rat cerebral cortex" J.Pharm.Pharmacol.49. 802-805 (1997)
• [Publications] 鈴木史子: "ウサギα_<1d>-アドレナリン受容体のクローニング" 眼薬理. 11(1). 37-38 (1997)