1997 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子導入ハエを用いたDNA複製関連遺伝子の発現制御に関する研究
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09277230
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| Research Institution | Aichi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
廣瀬 富美子 愛知県がんセンター, 生物学部, 主任研究員 (60208882)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山岸 正裕 工業技術院生命工業技術研, 分子生物部, 主任研究官 (00220252)
山口 政光 愛知県がんセンター, 生物学部, 室長 (00182460)
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| Keywords | ショウジョウバエ / DNA複製 / 転写因子 / 遺伝子導入ハエ |
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| Research Abstract |
個体を用いたDREFの機能解析に必要な遺伝子導入ハエを樹立し、DREFの異所的な発現によってもたらされDNA複製や細胞増殖の異常を詳細に解析し、以下の結果を得た。(1)DNA結合活性および二量体形成活性の両者を有するDREFのN端125アミノ酸残基は、dominant-negativeな効果をもつことが明らかとなった。(2)唾腺においては、dominant-negative型DREFを発現させると、この組織におけるDNA複製が阻害され、DNAの多糸化の程度が抑えられたことから、DREFはendo cycleにおけるDNA複製に必須であることが証明された。(3)glass遺伝子のプロモーターを利用して、複眼原基のpost-mitoticな分化過程にある細胞で野生型DREFタンパク質を発現させると、異所的なDNA複製とアポトーシスが誘導され、秩序だった複眼の形態形成は乱されて、rough eye phenotypeを示した。また、正常な分化も乱されて、光受容細胞R1,R6,R7の形質を示す細胞が形成されなかった。このことは、DREFは、細胞増殖と分化の接点で機能する転写因子であることを意味する。(4)DREFの哺乳類細胞におけるホモログを単離する準備として、Drsosophila melanogasterの近縁種であるDrosophila virilisよりDREFホモログの遺伝子を単離し、よく保存された領域が3つ(CR1,CR2,CR3)あることを明らかにした。(5)DREFと相互作用する因子の遺伝子を単離するための、遺伝学的スクリーニングの準備を整えた。
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[Publications] Hayashi,Y.et al: "Identification of CFDD (Common regulatory factor DNA replication and DREF gene) and rela its binding cite in regulation of the proliferating nuclear antigen gene promoter" J.Biol.Chom. 272. 23848-23858 (1997)
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[Publications] Takahashi,Y.et.al.: "Involvement of the DNA replication-related element (DRE) and DRE-binding factor (DREF) in transcriptional regulation of the Bombyx mori PANA gene" J.Biochem. 122. 1215-1223 (1997)
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[Publications] Yamaguchi,M.et.al.: "Distinct roles of E2F recognition sites as positive and negative elements in regulation of DNA polymeraseα 180kDa codalytic subunit gene promoter during Drosophila development" Nucleic Acids Res.25. 3847-3854 (1997)
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[Publications] Kuge,M.et al.: "Use of a fusion protein to obtain crystal suitable for x-ray analysis : Crystallization of a GST-fused protein containing the DNA-binding domain of DNA replication-ralatef element binding factor," Protein Sci.6. 1783-1786 (1997)
