1997 Fiscal Year Annual Research Report

感染細胞内でそのアンチセンス機能を発揮するオリゴヌクレオチドの構築の感染制御

Research Project

Project/Area Number	09309011
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
Research Institution	Chiba Institute of Technology
Principal Investigator	高久洋千葉工業大学, 工学部, 教授 (50101267)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	高井和幸東京医科歯科大学, 医学部, 講師 (40260848) 山本直樹東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (00094053)
Keywords	環状DNA / RNAキメラオリゴマー / アンチセンスDNA / センスRNA / RNaseH活性 / レトロウイルス / 感染細胞 / 耐分解酵素性
Research Abstract	臨床実験で使用されているホスホロチオエ-トオリゴマーは本来のアンチセンス機構とは異なる作用をすることが明らかとなり、本研究ではこの問題点を解決すべく新しい概念、すなわちウイルスが感染した細胞内でその機能をはじめて発揮するオリゴヌクレオチドを考案した。このオリゴマーはダンベル型DNA/RNAキメラオリゴマーでRNaseH酵素により、RNA分子が切断された後に、遊離DNAアンチセンスオリゴマーが標的となるウイルスmRNAに結合してウイルスタンパク質の合成を阻害する。はじめに環状ダンベルDNA/RNAキメラオリゴマーの構築を試みた。標的遺伝子をウイルスmRNAのタンパク質合成翻訳部位AUGを含み、これに相補的なアンチセンスDNAとセンスRNAを含むニックダンベルDNA/RNAキメラオリゴマーを自動合成機を用いて容易に化学合成することができた。このニックオリゴマーをT4DNAリガーゼでライゲーションを試みたがニック部位の塩基配列によりそのライゲーションの効率に影響することがわかった。ここで得られたオリゴマーが細胞外で二重鎖部分が開裂し、オープンサークルとなれば分解酵素で分解されたり、細胞膜透過性が低下することから、二重鎖の安定性を検討したところ、二重鎖のみのDNA/RNA、ニックオリゴマーよりも高い融解温度、またゲル電気泳動でも安定な構造を形成していることがわかった。さらに、3′-エキソヌクレアーゼ(スネ-クベノムホスホジエステラーゼ)と10%牛血清中での耐分解酵素性を検討したところ、期待通り他のオリゴマーよりも安定であることが明らかとなり、新しいタイプのアンチセンスオリゴマーとなりうることがわかった。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Satoru Tsukahara: "Inhibition of HIV-1 replication by triple-helix forming phosphorothioate oligonucleotides targeted to the polypurine tract." Biochem.Biophys.Res.Commun.233. 742-747 (1997)
[Publications] Hidefumi Yamakawa: "Anti-influenza virus activities of nicked and circular dumbbell RNA/DNA chimeric oligonucleotides" Nucleosides and Nucleotides. 16. 1713-1716 (1997)
[Publications] Takashi Hiratou: "Inhibition of HIV-1 replication by foldback triple-helic forming oligonucleotides." Nucleic Acids Res.Symp.Ser.37. 221-222 (1997)
[Publications] Takayuki Abe: "Synthesis and anti-influenza virus-A of circular dumbbell RNA/DNA chimeric oligonucleotides." Nucleic Acids Res.Symp.Ser.37. 219-220 (1997)
[Publications] 八田俊史: "インフルエンザウイルスのアンチセンス核酸による治療(日本臨床)" 日本臨床社, 6 (1997)
[Publications] 高久洋: "AIDSのアンチセンス核酸療法(BIO Industry)" C.M.C., 10 (1997)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

感染細胞内でそのアンチセンス機能を発揮するオリゴヌクレオチドの構築の感染制御

Principal Investigator

高久 洋 千葉工業大学, 工学部, 教授 (50101267)

Research Products

[Publications] Satoru Tsukahara: "Inhibition of HIV-1 replication by triple-helix forming phosphorothioate oligonucleotides targeted to the polypurine tract." Biochem.Biophys.Res.Commun.233. 742-747 (1997)

[Publications] Hidefumi Yamakawa: "Anti-influenza virus activities of nicked and circular dumbbell RNA/DNA chimeric oligonucleotides" Nucleosides and Nucleotides. 16. 1713-1716 (1997)

[Publications] Takashi Hiratou: "Inhibition of HIV-1 replication by foldback triple-helic forming oligonucleotides." Nucleic Acids Res.Symp.Ser.37. 221-222 (1997)

[Publications] Takayuki Abe: "Synthesis and anti-influenza virus-A of circular dumbbell RNA/DNA chimeric oligonucleotides." Nucleic Acids Res.Symp.Ser.37. 219-220 (1997)

[Publications] 八田俊史: "インフルエンザウイルスのアンチセンス核酸による治療(日本臨床)" 日本臨床社, 6 (1997)

[Publications] 高久 洋: "AIDSのアンチセンス核酸療法(BIO Industry)" C.M.C., 10 (1997)

高久洋千葉工業大学, 工学部, 教授 (50101267)

[Publications] 高久洋: "AIDSのアンチセンス核酸療法(BIO Industry)" C.M.C., 10 (1997)