1999 Fiscal Year Annual Research Report
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09355027
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture and Technology |
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Principal Investigator |
松岡 英明 東京農工大学, 工学部, 教授 (10143653)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川名 明夫 NTT基礎研究所, 物質科学研究部・川名研究グループ, グループリーダー. (研究職)
斉藤 美佳子 東京農工大学, 工学部, 助手 (20291346)
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| Keywords | バイオセル / ストレス応答遺伝子 / GFP / マイクロキャピラリー |
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| Research Abstract |
近年、様々なストレスのメカニズムを調べるには、in vivoで遺伝子発現を調べることの重要性が指摘されている。そこで、in vivoかつ細胞単位(バイオセル)での遺伝子発現を解析するシステムを構築しようと考えた。今年度は、次の項目を実施した。
1.多チャンネル型マイクロキャピラリーの精密加工技術の開発:2チャンネル型石英管をレーザープラーを用いることで、先端直径0.1μm以下、先端から50μmでの外形10μm以下にすることができるようになった。また、レーザープラーの使用により再現性も増加した。
2.イネ培養細胞への遺伝子導入と、発現解析:導入する遺伝子としてイネキチナーゼのプロモーターにグリーン蛍光タンパク(GFP)のcDNAを酢入試多プラスミド(pCHI-GFP)を用いた。pCHI-GFPを細胞に導入した後に、エリシターを細胞内に導入したがGFPの蛍光は見られなかった。そこでセカンドメッセンジャーとして知られているCa^<2+>濃度変化が、チキナーゼの遺伝子発現に関与していることを別の研究より明らかにしているので、pCHI-GFPを導入した細胞に直接Ca^<2+>を導入した。その結果、約50%の細胞からGFPの蛍光が観察された。以上のことから、イネキチナーゼが遺伝子の発現には、Ca^<2+>が重要な役割を果たしていると考えられた。
3.顕微鏡蛍光画像解析システムの開発:細胞内のCa^<2+>濃度変化は、Ca^<2+>感受性蛍光色素(Fluo-3)により解析した。このために、新たに冷却CCDカメラを有したシステムを開発した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Hidekazu Sotoyama: "Control of the Cross Membrane Potential of a Culutured Tabacco Cell and Simulataneous Measurement of the Electrical Impedance of Its Membrane."Electrochemistry.. 67(1). 18-21 (1999)
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[Publications] Hideaki Matsuoka: "Control of the Quantity and the Timing of Microinjection into a Bio-Cell with a Multifunctional Microelectrode."Electrochim. Acta.. 44. 3801-3807 (1999)
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[Publications] Hideaki Matsuoka: "Effects of a pulsing electric signal on the Cross Membrane Potential and the Cell Division Potentiality of a Single Cell of Tabacco"Bioelectrochem. Bioenerg.. 49. 65-72 (1999)
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[Publications] Mikako Saito: "Elicitor Action via Cell Membrane of a Cultured Rice Cell Demonstrated by the Single Cell Transient Assay"J.Biotechnol.. 76. 227-232 (2000)
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[Publications] Mikako Saito: "pH-Microelectrode-micropipette system for the measurement of Enzyme Reaction in Picoliter Space of a Living Plant Cell."Anal. Chim. Acta.. 404(2). 223-229 (2000)
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[Publications] Mikako Saito: "Control of Ca^<2+> Influx into a Single Rice Cell with an Electric Signal."Electrochemistry. in press.
