年齢推定に有用な体液マーカーの遺伝子クローニングおよび法医学的応用

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09357004
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 岸 紘一郎 群馬大学, 医学部, 教授 (30169841)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 矢澤 伸 日本抗体研究所, 副所長 ; 細見 修 群馬大学, 医学部, 助手 (30134274) ; 中島 たみ子 群馬大学, 医学部, 助手 (40008561) ; 竹下 治男 群馬大学, 医学部, 講師 (90292599) ; 安田 年博 群馬大学, 医学部, 助教授 (80175645)
• Keywords: 個人識別 / 年齢 / cDNA / 分子生物学 / 尿

Research Abstract

法医学において個人識別は極めて重要な研究分野の一つであるが、年齢に関する個人識別マーカーはほとんどない。本研究では、ヒト個体の加齢の各ステップを決定しうる生化学的マーカーに着目し、これらマーカーを年齢推定に活用することを目的とした。
1. 従前の研究から17歳以下の若年者尿中には存在するが、それ以上になると検出できなくなる酸性糖タンパク質(Ugl-Y)を見出した。若年者尿から精製したUgl-Yに関するタンパク質化学的解析から、Ugl-Yの全アミノ酸配列の98%以上を決定した。さらに、その構造はfibronectinの一領域にほぼ一致することが明らかとなった。
2. 1項で得られたUgl-Yに関する部分アミノ酸配列の知見に基づき、3′-rapid amplification of cDNA ends法を用いUgl-YmRNAの部分配列を構築したところ数種類の類似した増幅産物が得られた。さらにノザンハイブリダイゼーションによってUgl-YmRNAとして予想されるサイズと矛盾しないmRNA分子種の存在が認められ、これらの結果はfibronectin遺伝子に関するalternative splicing機構によってUgl-YmRNAが生じた可能性を示唆した。現在、Ugl-Yの完全長cDNAの構築に取り組んでいる。
3. 新規な年齢依存性マーカーを見出すため、週令の異なるラットについてdifferential display法を適用し週今に依存して変化を示すmRNA種を検索した。その結果、aldehyde dehydrogenaseをコードするmRNAを含め幾つかの種類のmRNAに週令に依存した変動が認められることを明らかにした。現在、これらmRNA由来の年齢依存マーカーがヒト体液中などからも検出しうるかなど法医学的応用に取り組んでいる。

Research Products

• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Activity measurement of deoxyribonucleases I and II with picogram sensitivity based on DNA/SYBR Green I fluorescence" Anal.Biochem.255(2). 274-276 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Molecular cloning of the cDNA encoding human deoxyribonuclease II" J.Biol.Chem.273(5). 2610-2616 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Chromosomal localization of a human deoxyribonuclease II gene(DNase II)to 19p13.2-13.1 using both the polymerase chain reaction and fluorescence in situ hybridization analysis" Biochem.Biophys.Res.Commun.244(3). 815-818 (1998)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Detection of the two short tandem repeat loci(HumTPO and HumLPL)in Japanese populations using discontinuous polyacrlamide gel electrophoresis" Jpn.J.Legal Med.52(2). 139-143 (1998)
• [Publications] Shoichi Tsutsumi: "Phenotype 2 of deoxyribonuclease I may be used as a risk factor for gastric carcinoma" Cancer. 82(9). 1621-1625 (1998)
• [Publications] Tamiko Nakajima: "Two novel screening methods for selecting monoclonal antibodies which specifically inhibit DNase I enzyme activity" Immunol.Invest.27(3). 145-152 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Structure and organization of the human deoxyribonuclease II(DNase II)gene" Ann.Hum.Genet.62(4). 299-305 (1998)
• [Publications] Reiko Iida: "Detection of isozymes of deoxyribonucleases I and II on electrophoresed gels with picogram sensitivity using SYBR Green I" Electrophoresis. 19(14). 2416-2418 (1998)
• [Publications] Osamu Shimada: "Detection of deoxyribonuclease I along the secretory pathway in Paneth cells of human small intestine" J.Histochem.Cytochem.46(7). 833-840 (1998)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Identification of the three non-identical subunits constituting human deoxyribonuclease II" FEBS Lett.440(1/2). 239-242 (1998)
• [Publications] Osamu Hosomi: "Xenopus laevis pancreatic DNase I: purification and characterization" Exp.Clin.Immunogenet.(in press). (1998)
• [Publications] Reiko Iida: "Deoxyribonuclease I phenotyping from saliva stains" J.Forensic Sci.44(1). 175-178 (1999)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "High activity of deoxyribonuclease I identified in human pituitary gland-structure and function-" Jpn.J.Legal Med.52(5). 295-300 (1998)
• [Publications] 安田年博: "ヒトdeoxyribonuclease II(DNase II)に関する最近の研究" 北関東医学. 49(1). 39-41 (1999)
• [Publications] 飯田礼子: "PCR-SSCP法によって検出されたヒトdeoxyribonuclease I遺伝子内の新規なミスセンス変異" DNA多型. 6. 132-135 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Structural requirements of a human deoxyribonuclease II for the development of the active enzyme form,revealed by site-directed mutagenesis" Biochem.Biophys Res.Commun.(in press). (1999)