年齢推定に有用な体液マーカーの遺伝子クローニングおよび法医学的応用

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09357004
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 岸 紘一郎 群馬大学, 医学部, 教授 (30169841)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中島 たみ子 群馬大学, 医学部, 助手 (40008561) ; 竹下 治男 群馬大学, 医学部, 講師 (90292599) ; 安田 年博 群馬大学, 医学部, 助教授 (80175645) ; 矢澤 伸 日本抗体研究所, 副所長
• Keywords: 個人識別 / 年齢推定 / PCR / differential display / 分子生物学 / 遺伝子発現 / 年齢依存性

Research Abstract

法医学において個人識別は極めて重要な研究分野の一つであるが、年齢に関する個人識別マーカーはほとんど知られていない。本研究では、ヒト個体の加齢の各ステップを決定しうる生化学的マーカーに着目し、これらマーカーを年齢推定に活用することを目的とした。
本年度は、年齢推定に利用しうる年齢依存性生体分子を検索するため、分子生物学的アプローチとして遺伝子発現パターンの年齢依存的変化を精査した。遺伝子発現量の変動をモニターする有効な方法であるfluorescence differential display(FDD)-PCR法を利用して、出生後3日から15ヶ月までの異なった成長段階におけるマウス腎臓の遺伝子発現を解析した。その結果、comparativeRT-PCR法および定量的TaqManRT-PCR法を併用して7種類の遺伝子で有意な年齢依存的発現の認められることを見出した。塩基配列分析から、7種類のうち4種類はfibronectin,soluble guanylyl cylase alpha 1 subunit,cytosolic aldehyde dehydrogenaseおよびmitochondriaDNAであり、残りは新規な遺伝子であることが明らかとなった。そのなかには老年期のみに発現されるものなど様々な年齢依存的発現パターンが認められた。特に、fibronectinはその類縁タンパク質を若年者特異的尿中タンパク質(Ugl-Y)として従前の研究において見出したものであり、その関連性は興味深い。本研究結果はFDD-PCR法が年齢依存的発現を示す遺伝子の検索には有効な手段であることを証明するものであった。今後は、本法によって見出された年齢依存的発現を示す遺伝子について、その産物が法医学的試料から検出しうるものか否かを検討して年齢推定マーカーとして活用する予定である。

Research Products

• [Publications] Reiko Iida: "Deoxyribonuclease I phenotyping from saliva stains"The Jourual of Forensic Sciences. 44(1). 175-178 (1999)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Structural requirement of human deoxyribonuclease II for the development of the active enzyme form,revealed by site-directed mutagenesis"Biochemocal and Biophysical Research Communications. 256(3). 591-594 (1999)
• [Publications] Osamu Hosomi: "Xenopus laevis pancreatic Dnase I:purification and characterization"Experimental and Clinical Immunogenetics. 19(2). 117-123 (1999)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "A new allele,DNASE1^*6,of human deoxyribouuclease I polymorphism encodes an Arg to Cys substitution responsible for its instability"Biochemocal and Biophysical Research Communications. 260(1). 280-283 (1999)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Simultaneous typing of the STR loci,vWF and HumTPO,using discontinuous polyacrylamide gel electrophoresis"Legal Medicine. 1(3). 233-237 (1999)
• [Publications] Yoshimitsu Nakashima: "Molecular,biochemical and immunological studies of hen pancreatic deoxyribonuclease I"International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 31(11). 1313-1324 (1999)
• [Publications] Tamiko Nakajima: "Rapid purification of human Dnase I using mouse monoclonal anti-Dnase I antibodies and characterzation of the antibodies"Experimental and Clinical Immunogenetics. (in press).
• [Publications] Reiko Iida: "Age-related changes of gene expression in mouse kidney:fluorescence differential display-PCR analysis"Mechanisms of Ageing and Development. 113(2). 113-142 (2000)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "The molecular basis for genetic polymorphism of human deoxyribonuclease II (Dnase II)"FEBS Letters. 467(1/2). 231-234 (2000)
• [Publications] Osamu Hosomi: "Molecular cloning of cDNA encoding Xenopus Laevis deoxyribonuclease I"DNA Sequence. (in press).
• [Publications] 藤川克行: "日本人のトランスフェリン多型に認められる地理的勾配(埼玉県および青森県在住者を中心として)"血液事業. 21(4). 279-287 (1999)
• [Publications] 安田年博: "ヒトdeoxyribonuclease II(Dnase II)に関する最近の研究"北関東医学. 49(1). 39-41 (1999)
• [Publications] 岸紘一郎: "Dnase I"日本臨床. 57(増刊). 486-489 (1999)
• [Publications] 竹下治男: "不連続系ポリアクリルアミドゲル電気泳動を利用した2種類のSTR座位(vWFおよびHumTPO)の同時検出"DNA多型. 7. 88-90 (1999)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Postmortem absorption of dichloromethane:a case study and animal experiments"International Journal of Legal Medicine. (in press).
• [Publications] Haruo Takeshita: "Mammalian deoxyribonucleases I are classified into three types:pancreas,parotid and pancreas-parotid(mixed) types,based on differences of their tissue concentrations"Biochemical and Biophysical Reseach Communications. (in press).