年齢推定に有用な体液マーカーの遺伝子クローニングおよび法医学的応用

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09357004
• Research Institution: Gunma University School of Medicine
• Principal Investigator: 岸 紘一郎 群馬大学, 医学部, 教授 (30169841)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中島 たみ子 群馬大学, 医学部, 助手 (40008561) ; 竹下 治男 群馬大学, 医学部, 講師 (90292599) ; 安田 年博 群馬大学, 医学部, 助教授 (80175645) ; 矢澤 伸 日本抗体研究所, 副所長
• Keywords: 年齢推定 / 年齢依存性 / 遺伝子発現 / マウス腎臓 / cDNA cloning / 遺伝子クローニング / 加齢

Research Abstract

法医学において個人識別は極めて重要な研究分野の一つであるが、年齢を推定しうるマーカーの数は極めて少ない。本研究では、ヒト個体の加齢の各ステップを決定しうる生化学的マーカーに着目し、これらマーカーを用いた法医学的試料からの年齢推定法を確立することを目的とした。本年度は、法医学的年齢推定マーカーを見出すため年齢依存的な発現様式を示す遺伝子の検索を行ったところ、マウス腎臓に発現する3種類の新規遺伝子を発見した。さらに、そのひとつであるAI482564について、cDNA cloningおよび発現解析を行った。
rapid amplification of cDNA end法によるcDNA cloningの結果、AI482564cDNAは全長3,058 bpであることを明らかにできた。このcDNA中のopen reading frameは194アミノ酸残基よりなる分子量約2.2万のタンパク質をコードしており、3つの膜貫通領域を含んでいた。この配列のBLAST検索から、ペルオキシソームの膜タンパク質であるMpv17およびPMP22との間にそれぞれ31%および24%の相同性があることが示された。そこで、この新規なたんぱく質をMpv17 domain familyに属するものとしてM-LPと命名した。さらに、その遺伝子は全長5 kbに及び、3個のエキソンから構成されていた。Northernblot解析では、約1.5 kbおよび約3.5 kbの2本のバンドが検出され、M-LPは少なくとも2種類のmRNAとして発現しているものと考えられた。また、comparative RT-PCR法により、M-LP遺伝子の発現量は成長期に増加し、その後加齢とともに緩やかに減少することが明らかになった。現在、M-LPのヒトにおけるホモローグの検索と法医学的試料からの検出法の開発を継続している。

Research Products

• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Molecular cloning of cDNA encoding Xenopus iaevis deoxyribonuclease I"DNA Sequence. 11(3/4). 247-255 (2000)
• [Publications] Tamiko Nakajima: "Rapid purification of human DNase I using mouse monoclonal anti-DNase I antibodies and characterization of the antibodies"Experimental and Clinical Immunogenetics. 17(2). 71-76 (2000)
• [Publications] Reiko Iida: "Age-related changes of gene expression in mouse kidney fluorescence differential display-PCR analysis"Mechanisms of Aging and Development. 113(2). 133-142 (2000)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "The molecular basis for genetic polymorphism of human deoxyribonuclease II (DNase II)"FEBS Letters. 467(1/2). 231-234 (2000)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Mammalian deoxyribonuclease I are classified into three types"Biochemical and Biophysical Research Communications. 269(2). 481-484 (2000)
• [Publications] Souichi Tsutsumi: "Association of DNase I phenotype 2 with colorectal carcinoma risk in a Japanese population"Cancer Letters. 159(1). 109-112 (2000)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Geographical north-south decline in DNase I allele 2 in Japanese populations"Human Biology. 73(1). 129-134 (2000)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Japanese population data for two STR loci, HumTPO and HumLPL"Legal Medicine. 2(2). 64-67 (2000)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Postmortem absorption of dichloromethane : a case study and animal experiments"International Journal of Legal Medicine. 114(1/2). 96-100 (2000)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Activity staining for detection of ribonulceases by means of the dried agarose film overlay method after electrophoresis"Methods in Enzymology. (in press). (2001)
• [Publications] Haruo Takeshita: "A death resulting from inadvertent intravenous infusion of exteral feed"International Journal of Legal Medicine. (in press). (2001)
• [Publications] Koichiro Kishi: "DNase I : structure, function, and use in medicine and forensic science"Legal Medicine. (in press). (2001)
• [Publications] 竹下治男: "DNASE1^*6遺伝子のつくる酵素の寿命は短い"DNA多型. 8巻. 207-210 (2000)
• [Publications] 飯田礼子: "年齢依存性発現を示すマウス腎の新規遺伝子検索"DNA多型. 8巻. 123-126 (2000)
• [Publications] 竹下治男: "STR座位HumTPOとHumLPL:日本人7集団のデーターについて"DNA多型. Vol.9(印刷中). (2000)
• [Publications] 飯田礼子: "マウス腎の年齢依存性発現遺伝子"DNA多型. Vol.9(印刷中). (2000)