Secretory Component Disruptedマウスの作成と解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09357016
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 茂呂 周 日本大学, 歯学部, 教授 (50059531)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 甲斐 藏 日本大学, 生物資源科学部, 助教授 (90115543) ; 佐藤 嘉兵 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (20059778) ; 竹之内 信子 日本大学, 歯学部, 助手 (50246914) ; 浅野 正岳 日本大学, 歯学部, 助手 (10231896) ; 岩瀬 孝志 日本大学, 歯学部, 講師 (80125046)
• Keywords: Secretory Component / Disrupted mice / ES cell / TT2 / neomycine / PCR法 / Southern blotting法 / キメラマウス

Research Abstract

すでに作製したexon5にneomycine resistance geneを導入したtargetting geneをES cellであるTT2にelectroporation法を用いてtransfectionし、150μg/mlのgenetecineを用いて約一週間選択した結果、TT2で約30個のコロニーが得られた。これらからgenomic DNAを通法によりproteinease Kおよびエタノール沈殿法により精製し、PCR法およびSouthern blotting法でES cellがhomologous recombinationを起しているか否かを確認した。
その結果、TT2にtransfectして得られたコロニーから2個のhomologous recombinationを示すコロニーを得た。
この2個のコロニーを用いてICRマウスから得た8細胞期胚にサンドイッチ法で融合させ、仮親にもどし、キメラマウスの作製を試みた。その結果、7匹のTT2由来の全身agoutiのキメラマウスが得られた。その遺伝形質について血液および尾からgenomic DNAを精製しPCR法およびSouthern blotting法で解析を行っているが、現在、PCR法でキメラマウスと考えられる所見が得られている。しかし、得られたキメラマウスは交配が困難であり、ICRマウスを用いてもどし交配を行っている。