キャプチャリングカセット法によるファージディスプレイライブラリーの速度論的選抜

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09450304
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 福崎 英一郎 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教授 (40273594)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 片倉 啓雄 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助手 (50263207) ; 四方 哲也 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教授 (00222399)
• Keywords: ファージディスプレイ / 速度論 / スクリーニング / エステラーゼ / ヌクレアーゼ

Research Abstract

Staphylococcal nuclease(SNase)-DNAを酵素-基質のモデルとしてファージディスプレイによる酵素活性の速度論的選択系を開発した。SNaseを提示したファージを作製し、そのアミノ基をN-succinimidyl-6-maleimiddohexanoateで修飾した。末端の一方をチオール基で、他方をビオチンで修飾したDNAをPCRで調製し、それぞれの末端を、修飾したファージ及びstreptavidinビーズと反応させることによってファージを固相に固定した。SNaseをCa2+で活性化することによって、固相に固定されたSNaseファージが溶離することが認できた。キチンマトリクスと基質DNAとの結合のためのタグ配列として利用するために、キチンをターゲットとして59残基ランダムオリゴDNAプールからSELEXスクリーニングによりキチンを特異的に認識するDNA配列を選抜した。140アミノ酸のランダム配列を表示したファージライブラリーを構築し、DNA結合能のあるファージクローンの選抜を行った。

Research Products

• [Publications] Fukusaki, E. et al.: "DNA aptamer that binds to chitin"Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 10(4)(印刷中). (2000)
• [Publications] Yomo, T. et al.: "Gradual development of protein-like global structures through functional selection"Nature Structural Biology. 6(8). 743-746 (1999)