2000 Fiscal Year Annual Research Report
新しい修飾核酸の合成とその人工RNA制限酵素創製への応用
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09450337
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
澤井 宏明 群馬大学, 工学部, 教授 (70012648)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
尾崎 広明 群馬大学, 工学部, 助手 (90211820)
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| Keywords | DNA / 修飾核酸 / RNA分解活性 / 標識化DNA / トリスアシン / 2位置換グアノシン誘導体 / 2'-デオキシウリジン誘導体 / 2'-位置換スクレオシド |
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| Research Abstract |
昨年度までの研究を更に進め、反応性が異なる2種の活性な置換基を5位に導入したデオキシウリヂン誘導体を特定の異なる位置に組み込んだ修飾オリゴDNAをDNA合成機を用いて合成した。次いでこのオリゴDNAを固相担体に結合した状態で,求核反応性が異なる2種の機能性基導入アミン類と順次反応することにより、2種の機能性分子を導入した複合修飾DNAの簡便な新合成法を開発した。デオキシウリヂンの5位に蛍光物質を導入した修飾オリゴDNAを合成し、DNAとたんぱく質との相互作用を蛍光挙動を基に研究した。また、糖部2'一位に置換基を持つデオキシウリヂン誘導体、アラビノ型ウリヂン誘導体の新規合成を進めた。これら糖部2'一位修飾デオキシウリヂンを組み込んだ修飾DNAは対応する相補鎖DNAとの2重鎖形成能が弱くなる事が認められた。また、新規なタイプの修飾DNAとしてDNAデンドリマーの合成とその応用の研究を進めた。さらにRNAを配列特異的に分解する触媒活性が期待される修飾オリゴDNAについて3種の観点から進めた。(1)5位に触媒基としてトリス(2-アミノエチルアミン)などポリアミン類を導入したα-デオキシウリヂン誘導体を組み込んだ修飾DNA,(2)デオキシグアノシンの2位にRNA切断活性を有するトリス(2-アミノエチルアミン)などを導入した修飾オリゴDNA,(3)糖部2'一位にトリス(2-アミノエチルアミン)を導入したデオキシウリヂン誘導体を組み込んだ修飾DNAを種々合成し、それらのRNA切断活性を研究した。これらのうち、2番目の2位置換グアノシンの2位の置換基は2重鎖のマイナーグルーブ側に位置する。この新しい修飾DNAはターゲットとなる配列を持つRNAを位置特異的に切断することが認められた。特に、標的箇所に1塩基分バルジアウトさせた場合、強い切断活性が認められ、人工RNA制限酵素としての応用が期待できる。
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[Publications] H.Ozaki,Y.Sato,S.Azuma,H.Sawai,: "Synthesis of oligodeoxyribonucleotide bearing 2'-S-alKyl residue and its effect on the duplcx stability"Nucleosides & Nucleotides. 12. 593-601 (2000)
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[Publications] K.Shinozuka,S.Kohgo,H.Ozaki,H.Sawai: "Multi-functionalization of oligodeoxynucleotide : a facile post-synthetic modification technique for the preparation of oligodeoxynucleotides with two different functional molecules"J.Chem.Soc., Chem.Comm.. 59-60 (2000)
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[Publications] A.Yamagata,R.Mastti,R.Kato,N.Nakagawa,H.Ozaki,H.Sawai,S.Kuramitsu,K.Fukuyama: "Interaction of UvrA and UvrB proteins with a fluorescent single-stranded DNA. Implication for slow conformational change upon interaction of UvrB with DNA"J.Bio.Chem.. 275. 13235-13242 (2000)
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[Publications] H.Sawai,M.Wada: "Nonenzymatic template-directed condensation of short-chained oligouridylates on a poly(A) template"Origins of Life and Evol.Bios.. 30. 503-511 (2000)
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[Publications] H.Ozaki,K.Nakajima,Chieko Izumi,Hiroaki Sawai: "Convenient synthesis of arabinonucleoside containing oligodeoxyribonucleotides"Nucleic Acids Res., Symp. Series. 44. 37-38 (2000)
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[Publications] Y.Suzuki,T.Otomo,H.Ozaki,H.Sawai: "Synthesis and properties of a new type DNA dendrimer"Nucleic Acids Res., Symp.Series. 44. 125-126 (2000)
