1998 Fiscal Year Annual Research Report
イネ人工染色体の構築と導入植物の作出-人工染色体の育種工学への利用の基盤
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09460006
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| Research Institution | National Institute of Genetics |
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Principal Investigator |
倉田 のり 国立遺伝学研究所, 系統生物研究センター, 助教授 (90178088)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野々村 賢一 国立遺伝学研究所, 実験圃場, 助手 (10291890)
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| Keywords | イネ / イネ人工染色体(RAC) / 酵母人工染色体(YAC) / セントロメア / テロメア / 人工染色体導入植物 / 育種工学 |
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| Research Abstract |
本年度は、昨年度に引き続き人工染色体の構築に必須のイネ動原体領域DNAの単離と構造解析を行うとともに、イネ導入用のベクターの準備も進めた。穀類の動原体周辺に共通して局在するCCS1は、ヒトの動原体特異的タンパクCENP-Bの結合部位CENP-B boxと類似の配列(CBLS)を含んでいる。昨年度はイネのCBLSを参考に、新規のCCS1様配列RCS1516(264bp)を得た。RCS1516はイネゲノム中に約数百コピー存在すると推定された。次にRCS1516を持つファージクローンIRCB11(14 kb)を選抜し、全塩基配列を決定したところ、基本単位が1.9kbの直列反復配列RCE1が3コピー見出された。本年度は上記RCE1繰り返し配列を用いて、蛍光in situハイブリダイゼーションを行った結果から、この配列がほとんどすべてのイネ動原体周辺に局在するが、染色体によりコピー数の異なる事が示された。さらにRCE1繰り返し配列を含むYACおよびBACクローンの選抜を行い、幾つかのpositiveclonesについて、その物理的構造の解析を行っている。YACクローンの物理地図を作成する過程で、数百のサブクローンを作り,それらのYACへの位置づけを試みたが、サブクローンはほとんどすべて反復配列であり、しかも多数の異なる種類を含んでいて,解析は相当な困難を伴っている。しかしRCE1を10コピー以上含むと考えられる候補YACクローンを用いたin situハイブリダイゼーションで、このYACが2組の染色体の動原体領域に強くハイブリダイズすることがわかり、すくなくとも2つのうちの1組の染色体では、このYACが動原体の構成DNAであることが示された。現在このクローンについてはイネ細胞への導入を検討中で、400kbあまりのクローンに植物選択マーカー、イネテロメア等をつなぎ込んで、導入ベクターを構築中である。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] K.R.Rajyashri,et al.: "Isolation and FISH mapping of Yeast Artifical Chromosomes(YACs)encompassing an allele of the Gm2 gene for gall midge resistance in rice." Theoretical and Applied Genetics. 97. 507-514 (1998)
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[Publications] J.Wu,et al.: "Physical mapping of duplicated genomic regions of two chromosome ends in rice." Genetics. 150. 1595-1603 (1998)
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[Publications] K.I.Nonomura and N.Kurata: "Organization of 1.9-kb repeat unit RCE1 in the centromeric region of rice chromosomes." Molecular and General Genetics. 261. 1-10 (1999)
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[Publications] Y.Ito,et al.: "Expression of novel homeobox genes in early embryogenesis in rice." Biochimica et Biophysica Acta. (in press). (1999)
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[Publications] I.Ashikawa,et al.: "Application of restriction fingerprinting with a rice microsatellite sequence assembling rice YAC clones" Genome. 42(in press). (1999)
