Xanthomonas属細菌の非病原性遺伝子産物が植物細胞核内で果たす役割

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09460026
• Research Institution: Shizuoka University
• Principal Investigator: 露無 慎二 静岡大学, 農学部, 教授 (30090541)
• Keywords: カンキツかいよう病 / かいよう形成遺伝子 / 核局在性配列 / 大腸菌 / hrpクラスター / 結合長口質

Research Abstract

apl1遺伝子を発現ベクターに接続し、大量生産後、カラムクロマトグラフィーによりSDS-PAGE上で単一バンドになるまで精製した。この精製たんぱく質を固定化したアフィニティークロマトグラフィーを用いて、カンキツ葉より、3種のターゲットたんぱく質を純化した。2種については、N末端部がブロックされていたたが、1種については、ブロックされておらず、そのアミノ酸絵列を決定することが出来た。このアミノ酸配列のホモロジー検索により、リグニン合成に関与する酵素の一部と高い相同性を示すことが明らかになった。このアミノ酸配列をコードする混合オリゴヌクレオチドを合成し、今後本たんぱく質合成遺伝子のクローニングして、本因子の作用機構を解明する足掛かりが出来た。また、apl1遺伝子の大腸菌及びXanthomonas campestris pv.vesicatoriaのクローンにPseudomonas syringaeグループのhrpクラスターを追加形質転換すると、これらの細菌がカンキツ葉にかいよう様症状を呈するようになることを発見した。接種部位を固定、染色後、光学顕微鏡下で観察すると、カンキツかいよう病菌を接種した場合と同様な植物細胞の肥大、異常分裂が観察された。hrpクラスターのクローンを導入しないapl1単独のクローンは全くかいよう症状を呈することが出来なかった。この結果、apl1遺伝子産物が植物細胞内に入りさえすれば、核に移行して、かいよう症状を呈することができることを示すことが出来た。

Research Products

• [Publications] Nomura,K.et al: "Self-regulaltor of Pir,a regulatory protein respousible for hyperiuduction of pecfate lyase in E.drysauthewi" Mole.Microbe-Plant Interact.5. (1999)
• [Publications] Suzuki,S.et.al: "Activity of pectiases in conidia and gewlings of Blumeria gaminis and the experssion of their geves" Awn.Phytopath.Soc.Japan. (1999)
• [Publications] Kanamori,H.et al: "Isolation of hrp clustel from Xanthovron as caupestn pv citai and it application for RFLP avaylyees" Awn.Phytopath.Soc.Japan. (1999)
• [Publications] Nomura,K.et al: "The pir geve of Eroinia dnysavthemi ECI6 ragnsates hyperinduction of pectale lyase viruleuce genes in" Proc.Nat.Acad.Sci.USA.95(24). 14034-14039 (1998)
• [Publications] Kanamori,H.: "Conporison of nucleotile sequences of canker-forming and non-cauker forming pthA homologues in" Awn.phytopath. Soc.Japan. 64(5). 462-470 (1998)
• [Publications] 露無慎二: "植物病原細菌の病原性関連因子に関する分子生物学的解析" 日本植物病理学会報. 64(4). 238-240 (1998)
• [Publications] 久能均 他4名: "新編植物病理学概論" 養賢堂, 335 (1998)
• [Publications] 真山滋志: "植物と病原体α情報応答機構" 日本植物病理学会, (1998)