1999 Fiscal Year Annual Research Report
卵胞の選択死:顆粒層細胞にアポトーシスを誘導する新規細胞死受容体の同定と分子制御
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09460127
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
眞鍋 昇 京都大学, 大学院・農学研究科, 助教授 (80243070)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
福本 学 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (60156809)
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| Keywords | 卵巣 / 卵胞 / 顆粒層細胞 / アポトーシス / 細胞死受容体 / ブタ / モノクロナール抗体 / プログラム細胞死 |
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| Research Abstract |
哺乳類においては性周期毎に卵胞の99%以上を閉鎖によって選択的に死滅させる機構が存在し、この過程で顆粒層細胞が特徴的核濃縮像を呈しながら消失する。この分子機構を解明するため本研究を行い、次のことが分かった。すなわち、卵胞を構成する内外卵胞膜細胞、顆粒層細胞、卵丘細胞、卵母細胞を顕微鏡下に精密の分離できるブタ卵巣を材料として用い、健常卵胞から調整した顆粒層細胞を抗原として感作し、顆粒層細胞にアポトーシスを誘起させことのできるlgMクラスモノクロナール抗体を作成した。この抗体が認識するのは、顆粒層細胞にのみ局在する膜結合性糖蛋白で、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーに属するが既知の分子とは異なる新規な細胞死受容体である。蛍光抗体法とウエスタンブロット法ではこの抗体は顆粒層細胞とのみ反応し、胸腺、肝、精巣など既知細胞死受容体のFasやTNF受容体が発現する器官を含めて他の器官では陽性反応を検出できなかった。さらに、初代培養顆粒層細胞の培地にこの抗体を添加して培養した場合、特異的にアポトーシスを誘導でき、このアポトーシスは培地中にいくつかのカスパーゼ様プロテアーゼ阻害剤を添加した場合に阻害された。分子量、等電点、カスパーゼ様プロテアーゼ阻害剤に対する阻害スペクトルなどの生化学的特性、免疫化学的特性、組織化学的局在などがFasやTNF受容体ファミリーに類似するものの、既知の何れとも異なることから、卵胞顆粒層細胞にのみ局在する新規な細胞死受容体であることを証明できた。また同様にして、分子量42と55kDの2種の膜蛋白を認識するlgGクラスモノクロナール抗体を作成した。この抗体はlgM抗体によるアポトーシスを阻害することや抗原蛋白の解析から、新規受容体と細胞外構造が類似するDecoy受容体を認識するものと考えられ、卵胞の生死が特異的細胞死シグナル-受容体のみならず、偽受容体による細胞死シグナルからの回避によっても制御されていることが新たに示唆された。
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Selection of oocytes in mammalian ovaries"Tissue Culture Engineering. 25・1. 4-8 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Endocrine-disrupting contaminants in animal products"Obstetrics and Gynaecology. 66・1. 254-265 (1999)
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[Publications] Yuzuru IMAI et al.: "Interactions of apoptosis and extracellular matrices in granulosa cells of atretic follicles in porcine ovaries"Journal of Mammalian Ova Research. 16・1. 59-66 (1999)
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[Publications] Yoshihiro KIMURA et al.: "Up-regulation of the alpha 2, 6-sialyltransferase messenger ribonucleic acid increases glycoconjugates containing alpha 2, 6-linked sialic acid residues in granulosa cells during follicular atresia of porcine ovaries"Biology of Reproduction. 60・6. 1475-1482 (1999)
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[Publications] Kozue UCHIO et al.: "Abnormalities of extracellular matrices and transforming growth factor beta1 localization in the kidney of the hereditary nephrotic mice (ICGN strain)"Journal of Veterinary Medical Science. 61・5. 769-776 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Immunochemical characteristics of a novel cell death receptor and a decoy receptor on granulosa cells of porcine ovarian follicles"Cytotechnology. 14・6. 111-121 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Regulatory mechanisms of granulosa cell apoptosis in ovarian follicle atresia: Role of granulosa cell apoptosis in porcine ovarian follicle atresia. In: Animal Cell Ttechnology. Ikura K. et al. eds."Kluwer Academic Pub. Ltd., Dordrecht, The Nederlands. 968 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "A novel in vivo NMR technique to assess halocarbon induced hepatic failure in mice. In: Hazard Assessment and Control of Environmental Contaminants. Matsui S. et al. eds."IWA Conference Com. Pub., Oxford, United Kingdom. 634 (1999)
