リンパ球が産生し神経・内分泌系細胞に作用する新しいタイプのサイトカイン-ファジ-セットクローニング法による検索-

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09470028
• Research Institution: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• Principal Investigator: 柳原 延章 産業医科大学, 医学部, 助教授 (80140896)
• Keywords: カテコールアミン分泌 / サイトカイン / 神経・内分泌・免疫連関 / ファジ-セットクローニング / 副腎髄質 / リンパ球 / リンパ球由来因子

Research Abstract

この研究は、リンパ球で産生され神経・内分泌系に生理・薬理活性を示す因子を探求し、最終ゴールとしてその因子のクローニング及びその生理的役割を明らかにする目的で行われた。
まず最初、ウシ副腎髄質細胞とウシ腹部リンパ球を同時に培養すると、培養メディウム中のカテコールアミン量が増加してきた。次にリンパ球だけを培養し、その培養メディウムを副腎髄質細胞に添加して培養すると同様にメデイウム中のカテコールアミン量が増加した。この結果からリンパ球から何らかの因子がメデイウム中へ放出され、それが副腎髄質細胞に作用してメデイウムへのカテコールアミン分泌を促進していることが考えられた。このリンパ球由来因子の生化学的性質を調べてみると、熱感受性で分子量が10kDa以上であることが判明した。このリンパ球由来因子を硫酸アンモニウム分画及び各種カラムクロマトグラフィーにより部分精製した。この部分精製した因子に対する抗体(ファジ-抗体)をウサギに免疫感作して作製した。ウシ脾臓cDNAライブラリイ-を用いて大腸菌にてそれらの蛋白質を発現させ、上記のファジ-抗体にて検索した。その結果、この抗体と陽性反応を示したクローンを20ヶ得ることが出来、現在その遺伝子の部分塩基配列を解読している。
その他の研究成果として、サイトカインの一種インターフェロン-αを副腎髄質細胞に長期処理するとアセチルコリン刺激によるカテコールアミン分泌が抑制された。以上のように既存のサイトカインや今回見出したリンパ球由来因子が神経・内分泌系細胞に作用してその細胞機能を修飾している可能性を示した。

Research Products

• [Publications] Nobuyuki Yanagihara: "Stimulatory effect of lymphocyte-derived factor on catecholamine efflux from cultured bovine adrenal medullary cells" Neuroscience Letters. 242(in press). (1998)
• [Publications] Eiichi Tachikawa: "Interferon-α reduces catecholamine secretion from bovine adrenal chromaffin cells stimulated by acetylcholine" Naunyn-Schmiedberg's Archieve of Pharmacology. 356. 699-705 (1997)
• [Publications] Shigeki Yamamoto: "Parathyroid hormone-related peptide-(1-34)[PTHrP-(1-34)]induces vasopressin release from the rat supraoptic nucleus in vitro through a novel receptor" Endocrinology. 138. 2066-2072 (1997)
• [Publications] Reiji Yoshimura: "An active metabolite of carbamazepine,carbamazepine-10,11-epoxide,inhibits ion channel-mediated catecholamine secretion in cultured bovine adrenal medullary cells" Psychopharmacology. in press (1997)
• [Publications] Shigeki Yamamoto: "C-Type natriuretic peptide suppresses argine-vasopressin secretion from dissociated magnocellular neurons in newbarn rat supraoptic nucleus" Neuroscience Letters. 229. 97-100 (1997)
• [Publications] Yosuke Oishi: "Transmural compression-induced proliferation and DNA synthesis through activation of a tyrosine kinase path way in rat astrocytoma RCR-1 cells" Brain Research. (in press). (1997)
• [Publications] Nobuyuki Yanagihara: "Catecholamines:Bridging Basic Science with Clinical Medicine" Academic Press, 1084 (1998)