1997 Fiscal Year Annual Research Report
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09470029
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
木南 凌 新潟大学, 医学部, 教授 (40133615)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 由明 新潟大学, 医学部, 講師 (60115045)
三嶋 行雄 新潟大学, 医学部, 助教授 (30166003)
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| Keywords | 遺伝子難聴 / ポジショナルクローニング / ゲノム解析 / ミオシン遺伝子 |
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| Research Abstract |
sh-2変異マウスは内示の有毛細胞等に形態学的異常がみられるが、その原因遺伝子は不明である。sh-2遺伝子座に対応するヒト17番染色体領域には、遺伝性のヒト類似疾患難聴(DFNB3)があり、両者は同一の原因遺伝子によると考えられている。聴覚平衡感覚障害を示すsh-2マウスを利用し、この原因遺伝子座近傍の物理地図の作成および候補遺伝子の検索を行った。
詳細な遺伝地図が作成されていたので、YAC、BACを用いた物理地図の作成を行った。YACライブラリーのスクリーニングにはsh-2座近傍のMit316,Mgl-1,Mit157,Pmp22遺伝子をプローブに用いた。その結果、1Mbから1.5MbにおよぶYACのコンティーグが得られた。YACの構造解析、それぞれのYACの位置関係を明らかにするために、インサートDNAの両末端配列を単離し解析した。また、BACクローンの解析系を平行して行った。クローンのスクリーニングはYACのそれとほぼ同様に行った。プローブには先ずMit316,Mgl-1-L,Mgl-1,Mit26,Mit157を用いた。さらにYACクローンで行ったように末端をSTS化し、得られたクローンを連結した。全体で21のBACクローンからなるコンティーグが得られ、それは組換え個体が得られない(sh-2が存在する)領域を完全にカバーしている。
次に、sh-2座をカバーする連結BACクローン群を元に、エクソン領域を精力的にスクリーニングした。その結果、sh-2領域にsh-1難聴原因遺伝子である7型ミオシンと相同性をもつDNA配列が発見された。しかも、その遺伝子発現はsh-2マウスで著しく減弱しており、有力なsh-2候補遺伝子であると考えられる。現在、完全長cDNAクローンの単離と変異の同定を行っている。
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[Publications] Yuichi Wakabayashi: "Genetic and physical delineation of the region of the mouse deafness mutation SHAKER-2." Biochem.and Biophy.Res.Comm.234. 107-110 (1997)
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[Publications] Yukio Mishima: "Pairing of DNA fragments containing (GGA:TCC) repeats and promotion by high mobility group protein 1 and histone H1." J.Biol.Chem.272. 26578-26584 (1997)
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[Publications] Yasuo Matsumoto: "Allelic loss analysis of g-ray induced mouse thymic lymphomas:two candidate tumor suppresser gene loci on chromosomes 12 and 16." Oncogene. (in press). (1998)
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[Publications] Hisashi Hasegawa: "An anti-sm autoantibody cross-reacts with ribosomal protein S10:a common structural unit shared by the snRNP proteins and the ribosomal protein" Arthritis and Rheumatism. (in press). (1998)
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[Publications] Yoshio Endo: "Difference in chromatin packaging between active and inactive X chromosomes by fractionation and allelespecific detection." Biochem.and Biophy.Res.Comm.(in press). (1998)
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[Publications] Shuichi Sato: "Allele-specific inactivation of the a4 integrin gene expression in fibrosarcoma cell lines and relevance for spontaneous metastasis." Oncogene. (in press). (1998)
