1998 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
09470066
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Research Institution | 大分医科大学 |
Principal Investigator |
山本 俊輔 大分医科大学, 医学部, 教授 (90040188)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松浦 恵子 大分医科大学, 医学部, 助手 (00291542)
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Keywords | CD14 / CD156 / Osteopontin / エンドトキシン / メタロプロテアーゼ / ジスインテグリン / トランスジェニック / AD56 |
Research Abstract |
CD14について:1.CD14トランスジェニックマウス(TM)の解析:CD14のTMではマウス(m)CD14の模型と遊離型のTM(M14MおよびM14S)を作製し、C57BL/6Nマウス(B6)へのバッククロスを10代行いB6形質を持つTMを作製し、homozygote化を完了した。1).TMにおけるLPSに対する反応性:すでにヘテロマウスでLPSの単独投与、LPS/D-ガラクトサミン、LPS/P.acnes系反応を検討した。ホモTMでこれをさらに検討中である。2).諸炎症反応に対する反応性の検討:TMにおけるArthusおよびDTHを検討中である。3)メラノーマ細胞の転移の検討:B16細胞の静脈内投与に伴う肺転移がM14Mで強く起こることが観察され、現在その確認を急いでいる。2).mCD14N末端部アミノ酸71個をコードするTMの作出:N末端側71個のアミノ酸(N71)領域内にLPS結合部が存在することが予測されており、N71発現TMを作出し、LPSに対する反応性を検討中である。3).種々の菌成分に対する各TMの反応性:グラム陰性菌以外のP.acnesやBCGに対する各TMのCD14およびCKやiNOSの肝およびMφにおける発現を確認した2.リコンビナント(r)mCD14の作製:r17NをCHO細胞で得た。3.LPSおよびCKによるsmCD14の遊離動態および意義に関する実験:種々の濃度のLPS刺激によるsmCD14の遊離を経時的に観察し,LPS刺激に伴うsmCD14は初期にはinhibitor、後期には血管傷害因子として働くことを確認した。4.In vivoにおけるLPSおよびCKによるMφ系細胞のCD14およびCK発現:CD14,TNFα,IL-1β,IL-6,IL-10,IL-12の種々のMφ系細胞における発現を検討中である。CD156について:1.mCD156およびヒト(h)CD156蛋白の分離と利用:E.coli系ではすでにMT、DIドメインおよび両者を含むr蛋白を作製した。r蛋白を用いてmAbを作製し、CD156組織発現を検索した。r蛋白で低レベルのmetalloprotease(MTP)およびdisintegrin(DI)活性を検出した。さらに、より明確に活性を検討するためにIgGFcとの融合蛋白を哺乳動物細胞で発現させ蛋白の活性を検討中である。2.mCD156TMの樹立と解析:すでにmCD156TMの10Nを得た。さらに10Nと10Nでのホモマウスを樹立中である。可溶性mCD156の血中増加を観察した。mCD156を肝臓および腎臓に強く発現することを確認した。また、oxazoloneによる接触皮膚炎における好中球浸潤がnon-TMに比べより強く起こること、一方、カゼイン刺激炎では好中球の反応が抑制され、両者の違いを解析中である。2.新しいADAMファミリー蛋白AD56の解析:2)AD56cDNAの塩基配列解読:マウスAD56のcDNAを分離し全塩基配列を決定した。3.AD56のゲノム遺伝子の解読:AD56遺伝子の全構造を明らかにした。3.AD56蛋白の分離:MTP、DIドメインのs種々の細胞膜外部のr蛋白をFc融合蛋白として作製した。4.抗AD56蛋白抗体の作製と利用:AD56のr蛋白を用いて2種の単クロン抗体を作成し、免疫染色で諸臓器における発現を検索中である。OPNについて:OPN TMの10Nを確立した。
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