ヒト結節性硬化症の発症機序の解明

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09470068
• Research Institution: Japanese Foundation For Cancer Research
• Principal Investigator: 樋野 興夫 財団法人癌研究會, 癌研究所・実験病理部, 部長 (90127910)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 織本 健司 財団法人癌研究會, 癌研究所・実験病理部, 研究員 (50290953) ; 小林 敏之 財団法人癌研究会, 癌研究所・実験病理部, 研究員 (40260070)
• Keywords: ヒト結節性硬化症 / TSC2遺伝子 / TSC1遺伝子 / 癌抑制遺伝子 / 疾患モデル

Research Abstract

1。TSC2遺伝子蛋白の存在様式:
本遺伝子産物のペプチドおよび大腸菌で発現させたTsc2蛋白に対する抗体の作成に成功した。まず実際のヒトおよびラットの各組織における本蛋白の局在様式を明らかにした。さらに遺伝子変異の解析より病変部にはtruncated蛋白の存在が予想されるので正常部における局在との変化を観察した(submitted)。
2。TSC2遺伝子の発現調節機構:
TSC2遺伝子の5'端上流の解析を行い、Promoter領域を同定し、且つCAT assayによりbidirectionalなpromoter活性を見い出した(manuscript in preparation)。現在TSC2遺伝子の発現の制御機構について解析中である。
3。TSC2遺伝子の作用の下流に位置し転写制御を受けている遺伝子群の単離:
テトラサイクリンオペレーターシステムによる誘導発現系を用い、Eker rat腎癌細胞株に野生型Tsc2遺伝子を導入した安定形質転換細胞株を樹立した。この細胞株を用いて、テトラサイクリンを添加しTsc2遺伝子を発現させない状態と、テトラサイクリンを除去しTsc2遺伝子を発現させた状態間で、我々が改良したRDA(Representational Defference Analysis)を用いcDNAサブトラクションを行い、Tsc2遺伝子により発現が誘導される遺伝子群を単離した(submitted)。
4。TSC1遺伝子の構造決定:
ラットのTSC1遺伝子のexon&intronの構造を決定した(manuscript in preparation)。

Research Products

• [Publications] Kobayashi,T.: "Intragenic Tsc2 somatic mutation as Knudson's second hit in spontaneous and chemically induced renal carcinomas in the Eker rat model." Jpn.J.Cancer Res.88. 254-261 (1997)
• [Publications] Kobayashi,T.: "Trahsgenic rescue from embryonic lethality and renal carcinogenesis in the Eker rat model by introduction of a wild-type Tsc2 gene." Proc.Natl.Acad.USA.94. 3990-3993 (1997)
• [Publications] Kobayashi,T.: "Close proximity of the rat Tsc2 and Pkd1 genes." Rat Genome. 3. 8-11 (1997)
• [Publications] Urakami,S.: "Somatic mutation of the tuberous sclerosis(Tsc2) tumor suppressor gene in chemically induced rat renal carcinoma cell." J.Urology. 158. 275-278 (1997)
• [Publications] Kobayashi,T.: "Identification of a leader exon and a core promoter for the rat tuberous sclerosis 2(Tsc2) gene and structural comparison with the human homologue." Mammalian Genome. 8. 554-558 (1997)
• [Publications] Miki,S.: "Hyperlipidemia enhancement of renal prencoplasia but not tumor formation is due to elevated apoptosis in the Eker rat." Cancer Rrs.57. 4673-4676 (1997)
• [Publications] Urakami,S.: "Overexpression of menbers of the AP-1 transcriptional factor family from an early stage of renal carcinogenesis and inhibition of cell growth by AP-1 gene antisense oligonucleotides in the Tsc2 gene mutant(Eker) rat model." Biochem.Biophys.Res.Commun.241. 24-30 (1997)
• [Publications] Knudson,A.G.: "Genetic environmental interactions in cancer susceptibility in animal models." JNCI. 89. 1669-1672 (1997)