細胞性感染防御免疫誘導に必須は細胞内寄生性細菌の抗原外因子の同定とその機構

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09470075
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 光山 正雄 京都大学, 医学研究科, 教授 (10117260)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 河村 伊久雄 京都大学, 医学研究科, 助手 (20214695)
• Keywords: 細胞内寄生性細菌 / 感染防御免疫 / サイトカイン / インターフェロンγ / リステリア / リステリオリシン / 抗酸菌 / マクロファージ

Research Abstract

マクロファージの細胞内殺菌をエスケープして増殖する細胞内寄生性細菌による感染でみられる宿主細胞性免疫応答の誘導機構につき、とくにサイト力イン応答を惹起する抗原外因子を中心に解析してきた。リステリアのLLO(58kDaタンパク)が宿主IFN-γ産生誘導に最も重要な因子であることが明らかになったので、溶血素としても知られるこのタンパクの活性部位を特定するために、PCRを用いたりコンビナント標品を各種作成した。C末端を順次欠失させると、このファミリーの溶血素に保存されているECTGLAWEWWRの配列が溶血活性発現には重要であるが、マクロファージからのモノ力イン産生とNK細胞からの最終的なIFN-γ産生誘導には影響がなかった。一方N末端は50ヶのアミノ酸を欠失させると、溶血活性は示すがサイトカイン誘導活性は完全に消失した。また、溶血活性はコレステロール処理で失活するがサイトカイン誘導活性はむしろ著明となった。これらの結果から、この因子の溶血素活性(毒素活性)とサイト力イン誘導活性は同じポリペプチド中の異なった部位が重要であることが示唆された。この成績をもとにアミノ酸置換による詳細な特定を進行させている。またフルサイズのLLOをリポソームに封入して用いることにより、単独では感染防御免疫の誘導が困難なBCG死菌による再感染抵抗性THl細胞の誘導がマウスでは可能となった。抗酸菌については、そのマクロファージ内エスケープ因子と宿主サイト力イン誘導因子の検索に必要な、変異株作成法とスクリーニング法をほぼ確立したので、新年度にはその解析が進行する予定である、

Research Products

• [Publications] Ohya,S., Xiong,H., Tanabe,Y., Arakawa,M.& Mitsuyama,M.: "Killing mechanism of Listeria monocytogenes in activated macrophages as determined by an improved assay system." J.Med.Microbiol.47 (2). 211-215 (1998)
• [Publications] Yoshimoto,T., Wang,C, Yoneto,T., Waki,S., Sunaga,S., Komagata,Y., Mitsuyama,M., Miyazaki,J.& Nariuchi,H: "Reduced Th1 responses in interleukin-12 p40 transgenic mice." J.Immunol.160. 588-594 (1998)
• [Publications] Tachibana,T., Matsuyama,T.& Mitsuyama,M: "Characteristic infectivity of Sporothrix scehnkii to mice depending on routes of infection and inherent fungal pathogenicity." Medical Mycology. 36 (1). 21-27 (1998)
• [Publications] Xiong,H., Ohya,S., Tanabe,Y.& Mitsuyama,M.: "Administration of killed bacteria together with listeriolysin O induces protective immunity against Listeria monocytogenes in mice." Immunology. 94 (1). 14-21 (1998)
• [Publications] Ohya,S., Tanabe,Y., Makino,M., Nomura,T., Xiong,H., Arakawa,M.& Mitsuyama,M.: "The contributioin of reactive oxygen intermediates and reactive nitrogen intermediates to lsitericidal mechansims differ in macrophages activated pre- and postinfection." Infect Immuni. 66 (9). 4043-4049 (1998)
• [Publications] Tanabe,Y., Xiong,H., Nomura,T., Arakawa,M.& Mitsuyama,M.: "Induction of protective T cells against Listeria monocytogenes in mice by immunization with a non-immunogenic strain of bacteria and liposome-encapsulated listeriolysin O." Infect Immun. 67 (2). 568-575 (1998)
• [Publications] 光山正雄: "微生物学第7版(分担執筆)" 医学書院, 477 (1998)
• [Publications] 光山正雄: "標準微生物学第7版(分担執筆)" 医学書院, 551 (1999)