DNA型および血液型を利用した、性犯罪事件の容疑者の推定に関する法医学的研究

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09470122
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 安田 年博 群馬大学, 医学部, 助教授 (80175645)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 細見 修 群馬大学, 医学部, 助手 (30134274) ; 中島 たみ子 群馬大学, 医学部, 助手 (40008561) ; 竹下 治男 群馬大学, 医学部, 講師 (90292599) ; 岸 紘一郎 群馬大学, 医学部, 教授 (30169841)
• Keywords: 個人識別 / 精液 / デオキシリボ核酸分解酵素 / 遺伝的多型 / 遺伝子 / DNA型 / 分子生物学 / 遺伝マーカー

Research Abstract

精液(斑)からの個人識別能を向上させるためには、精液からの新しい個人識別マーカー(遺伝マーカー)の発見およびその個人識別への適応が必須である。本研究では、我々が発見した精液中の遺伝マーカーの一つであるデオキシリボ核酸分解酵素II(DNase II)に焦点を絞り、法医学的応用のための基礎的知見を得ることを目的とした。
1. 前年度解明したヒトDNase II cDNA構造に基づき、ヒトDNase II遺伝子構造を決定した。
DNase II遺伝子は全長6kbに及び、6個のエキソンから構成された。また、3'非翻訳領域には4カ所のpolyadenylation signalが存在しており、それらが作用した少なくとも3種類の鎖長の異なるDNase II mRNA分子種が転写されることを明らかとした。
2. PCR法ならびにfluorescence in situ hybridization法によって、ヒトDNase II遺伝子が第19染色体短腕13.2-13.1領域に座位することを決定した。
3. ヒト肝臓から精製したDNase IIに関する蛋白質化学的解析から、DNase IIは活性な状態で‘non-identical heterotrimeric'な構造をとることをつきとめた。この知見によって初めて哺乳類DNase IIのサブユニット構造が確定した。さらに、deletion mutagenesisによって構築した変異体の動物細胞における発現実験から、活性型DNase IIの形成にはproteolytic processingが必要であることを明らかとした。
4. 新しい蛍光試薬であるSYBR Greenを用いた感度の高いDNase II活性測定法ならびにアイソザイム解析法を開発した。これによって微量な法医学的試料からのDNase II解析が可能となった。

Research Products

• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Activity measurement of deoxyribonucleases I and II with picogram sensitivity based on DNA/SYBR Green I fluorescence" Anal.Biochem.255(2). 274-276 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Molecular cloning of the cDNA encoding human deoxyribonuclease II" J.Biol.Chem.273(5). 2610-2616 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Chromosomal localization of a human deoxyribonuclease II gene(DNase II)to 19p13.2-13.1 using both the polymerase chain reaction and fluorescence in situ hybridization analysis" Biochem.Biophys.Res.Commun.244(3). 815-818 (1998)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Detection of the two short tandem repeat loci(HumTPO and HumLPL)in Japanese populations using discontinuous polyacrlamide gel electrophoresis" Jpn.J.Legal Med.52(2). 139-143 (1998)
• [Publications] Shoichi Tsutsumi: "Phenotype 2 of deoxyribonuclease I may be used as a risk factor for gastric carcinoma" Cancer. 82(9). 1621-1625 (1998)
• [Publications] Tamiko Nakajima: "Two novel screening methods for selecting monoclonal antibodies which specifically inhibit DNase I enzyme activity" Immunol.Invest.27(3). 145-152 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Structure and organization of the human deoxyribonuclease II(DNase II)gene" Ann.Hum.Genet.62(4). 299-305 (1998)
• [Publications] Reiko Iida: "Detection of isozymes of deoxyribonucleases I and II on electrophoresed gels with picogram sensitivity using SYBR Green I" Electrophoresis. 19(14). 2416-2418 (1998)
• [Publications] Osamu Shimada: "Detection of deoxyribonuclease I along the secretory pathway in Paneth cells of human small intestine" J.Histochem.Cytochem.46(7). 833-840 (1998)
• [Publications] Haruo Takeshita: "Identification of the three non-identical subunits constituting human deoxyribonuclease II" FEBS Lett.440(1/2). 239-242 (1998)
• [Publications] Osamu Hosomi: "Xenopus laevis pancreatic DNase I: purification and characterization" Exp.Clin.Immunogenet.(in press). (1998)
• [Publications] Reiko Iida: "Deoxyribonuclease I phenotyping from saliva stains" J.Forensic Sci.44(1). 175-178 (1999)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "High activity of deoxyribonuclease I identified in human pituitary gland-structure and function-" Jpn.J.Legal Med.52(5). 295-300 (1998)
• [Publications] 安田年博: "ヒトdeoxyribonuclease II(DNase II)に関する最近の研究" 北関東医学. 49(1). 39-41 (1999)
• [Publications] 飯田礼子: "PCR-SSCP法によって検出されたヒトdeoxyribonuclease I遺伝子内の新規なミスセンス変異" DNA多型. 6. 132-135 (1998)
• [Publications] Toshihiro Yasuda: "Structural requirements of a human deoxyribonuclease II for the development of the active enzyme form,revealed by site-directed mutagenesis" Biochem.Biophys Res.Commun.(in press). (1999)