1998 Fiscal Year Annual Research Report
炎症性増殖性血管病変の分子病態解明と遺伝子治療法の開発 組換えアアデノウィルスを用いた血管壁・心臓への生体内遺伝子導入による病態解析と治療効果の検討
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09470170
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
上野 光 九州大学, 医学部, 講師 (50260378)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
居石 克夫 九州大学, 医学部, 教授 (70108710)
盛 栄三 東海大学, 医学部, 助教授 (90146598)
西田 誉浩 九州大学, 医学部, 助手 (50284500)
大原 郁一 九州大学, 医学部, 助手 (90185364)
筒井 裕之 九州大学, 医学部, 講師 (70264017)
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| Keywords | 遺伝子導入 / アデノウイルス / 変異型TGF-β受容体 / TGF-β / 細胞外マトリクス / C-type natriuretic peptide / NFxB |
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| Research Abstract |
1. C-type natriuretic peptide(CNP)産生アデノウィルスを用いて培養血管平滑筋細胞にCNP遺伝子を導入すると、TGF-βによる細胞外マトリクス成分の発現亢進が抑制されることをmRNAおよび蛋白レベルで確認した。CNP遺伝子を傷害血管壁に導入すると増殖性病変形成が抑制されることを昨年度観察したが、この抑制機序の1つが明らかとなった(論文準備中)。
2. 細胞外マトリクスの産生・蓄積が血管壁の硬化(弛緩反応の低下)と内腔の狭窄の主因であり、この過程はTGF-βで制御されている可能性が高い。この仮説を検証するために、TGF-βの作用を特異的に抑制できる変異型TGF-β受容体産生ベクタを作製し、傷害血管壁への導入を開始した。
3. 上記の戦略の有効性を検証するために変異型TGF-β受容体遺伝子を肝臓線維症モデルに導入した。すると肝線維化が著明に抑制され、血清中の肝細胞酵素は低値に保たれ、全例肝不全から救命できた。不可逆的線維化におけるTGF-βの中心的役割を実証するとともに線維化の抑制が治療的であることを初めて明らかに示した(論文印刷中)。方法の有効性が検証できた。
4. 受容体の細胞外ドメインのみの可溶型受容体を過剰発現させるとリガンドを吸着してその作用を抑制できる可能性がある。生体内でこの戦略が有効か否かを肝臓線維化モデルで検証したところ、変異型受容体と同様の抑制効果を観察し得た(論文投稿中)。この戦略では標的臓器の一部の細胞に遺伝子導入されればよいばかりか、全く離れた部位(たとえば筋肉)への導入でもよいことになり、遺伝子治療を想定する際には重要な知見である。
5. 血管壁細胞に進展刺激を加えるとNFκB依存的に組織因子の発現が冗進することがわかった。高血圧下での塞栓症の一因といえるかもしれない。この反応はlκBαの遺伝子導入で抑制できた(投稿中)。
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[Publications] Matsumoto T,et al.: "Pletelet-berived growth factor activates p38 mitogen activated protein kinase through ras-dependent pathway shiech is important for actin reorganization and cell miaration." Journal of Biological Chemistry. (in press).
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[Publications] Qi Z,et al.: "Blockade of TGF-β signaling prevents liver fibrosis and dysfunction." Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(in press).
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[Publications] Yamamoto H,et al.: "Roles of H-ras in signaling by TGF-β:H-ras is essential in activation of MAP kinase,partially involved in transcriptional activation by TGF-β but not in sinaling ofanti-proliferative response of TGF-β" Eur.J.Biochem.(in press).
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[Publications] Ohashi M,et al.: "Adenovirus-mediated p53 tumor suppressor gene therapy of human gastric cancer cells in vitro and in vivo." Gut. (in press).
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[Publications] Yukawa H,et al.: "In vitro growth suppression of vascular smooth muscle cells using adenovirus-mediated gene transfer of a truncated from of fibroblast growth factor receptor." Atherosclerosis. (in press).
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[Publications] Sakamoto T,et al.: "Trsnsfection of LacZ gene to retina by an adenoveral vector causes retinal dysfunction with no apparent morphological changes." Hum.Gene Ther.9. 789-799 (1998)
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[Publications] Takayama K,et al.: "The levels of integrin α V and β5 maywell predict the susceptibility to adenovinus-mediated gene transfer in human lung cancer cells." Gene Ther.5. 361-368 (1998)
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[Publications] Sakamoto T,et al.: "A vitrctomy improves the transfection efficiency of adenoviral vector-mekiated gene transfer to Muller cells." Gene Ther.5. 1088-1097 (1998)
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[Publications] LiQ,et al.: "Stretch-induced collagen synthesis in cultured smooth muscle cells from rabbit aortic media and possible involvment of angiotensin「 and TGFβ" J.Vasc.Res.35. 93-103 (1998)
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[Publications] Maru Y,et al.: "Virally activated Ras cooperates wit integrin to induce tubulogenesis in sinusoidal endothelial cell lines." J.Cell.Physiol.176. 223-234 (1998)
