心臓移植におけるB細胞抑制効果とそのメカニズムの解明に関する研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09470279
• Research Institution: Department of Surgery II, Ehime University School of Medicine
• Principal Investigator: 河内 寛治 愛媛大学, 医学部, 教授 (90116020)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山本 哲也 愛媛大学, 附属病院, 助手 (70240108) ; 濱田 良宏 愛媛大学, 医学部, 助手 (90218545) ; 加洲 保明 愛媛大学, 医学部, 助手 (40294813) ; 中田 達広 愛媛大学, 附属病院, 助手 (40260690)
• Keywords: 心臓移植 / ラット / B細胞 / 液性免疫 / モノクローナル抗体

Research Abstract

・【方法】心臓を異所性に移植したレシピエントに、抗ラットB細胞モノクローナル抗体Rub-1(IgG2a,mouse)を投与し、心臓グラフトの生存期間およびドナーリンパ球に対する細胞障害性抗体価の変化を調べた。心移植は、ACIラット(RT1^a)の心臓をLEWラット(RT1^l)の腹腔に異所性に移植し、抗体は移植後5日間600μg/kg/dayを腹腔内投与した。ドナー細胞障害性抗体価は、ACIラットリンパ球を50%溶解させる血清の希釈倍率をもってした。mRNAの測定は、心移植実験後末梢血単核球/脾臓細胞を経時的にそれぞれ分離、lysateより各群全RNAを抽出、得られたtRNAよりcDNAを作製、PCR法にて各遺伝子を増幅、PCR産物を泳動して、定量曲線を作成、定量解析し、現在IL-2の経時的変化を測定している。IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-αなどについても漸次検討する。LEWratIL-2のプライマーについて、β-Acin Forwardおよびβ-Acin Reverse、IL-2ForwardおよびIL-2Reverse 5'gTTgAgATgATgCTTTgACAgA 3'について検討した。
・【結果】FACSでは、Rub-1はLEWラットB細胞と特異的に反応した。PFCおよびMLRでは、Rub-1はB細胞の数を減らすことなくB細胞の抗体産生能を抑制したが、T細胞の機能は全く抑制しなかった。心臓移植は、コントロール群の腎臓心臓グラフトは術後平均5日で拒絶されたが、Rub-1投与群は10日以上と延長した。ドナー細胞障害性抗体価は、Rub-1投与群で有意に低下した。RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)を用いたサイトカインmRNA測定では明らかな結果は出なかった。
・【まとめ】抗ラットB細胞抗体の投与によってレシピエントB細胞の機能を抑制する方法は、同種移植において追加的治療法の可能性があると思われた。