1997 Fiscal Year Annual Research Report
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09470320
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
久保 俊一 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (20178031)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
滝川 正春 岡山大学, 歯学部, 教授 (20112063)
石田 敏博 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (20295653)
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| Keywords | 遺伝子治療 / 変形性関節症 / モルモット / アデノウイルスペクター / LacZ / TGF-β1 / 軟骨細胞 / プロモーター |
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| Research Abstract |
1.アデノウイルスペクター(Ax)を用いたモルモット膝関節への遺伝子導入:LacZおよびTGF-β1遺伝子をそれぞれ組み込んだAxを、6週令Hartley系雌性モルモット5匹の右膝関節内に注射をした。1週間後、膝関節を採取し、X-gal染色を行った。肝臓、腎臓、心臓、および脳から抽出した全RNAを用いてLacZに対するPCRを行った。また、関節液中のTGF-β1濃度をELIZAで測定した。X-gal染色では、滑膜、靭帯、および軟骨においてLacZ遺伝子の発現を認めた。PCRでは、LacZ遺伝子の発現は検出されなかった。これらの結果から、関節内への遺伝子導入法としてAx法が有効であり、関節外臓器への影響が少ないことが判明した。また、TGF-β1遺伝子を関節内投与した関節液中のTGF-β1濃度は、コントロールと比べ約8倍と有意に増加していた。このことから、Ax法による関節内へのTGF-β1遺伝子導入が有効であることが明らかになった。
2.病態特異的ベクターの開発:HSP70プロモーターをもつLacZおよびTGF-β1遺伝子発現ユニットを挿入したAxを作製した。これらを用いて、平板培養したヒト軟骨細胞様細胞株に対して遺伝子導入を行った。2日後に温熱ストレス(43℃、2時間)を細胞に負荷後、X-gal染色およびNorthern blottingを行った。LacZ遺伝子を導入した細胞では、温熱ストレスによりLacZ遺伝子の発現が誘導された。またTGF-β1遺伝子を導入した細胞では、温熱ストレスにより、導入したTGF-β1遺伝子の発現が亢進した。これらの結果から、HSP70プロモーターをAx上の発現ユニットに用いることによって、軟骨細胞における導入遺伝子の発現制御が可能であることが明らかになった。
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[Publications] Y.ARAI: "Adenovirus vector-mediated gene transduction to chondrocytes:In vitro evaluation of therapeutic efficacy of transfouming growth factor-β1(TGF-β1)and heat shock protein 70(HSP70)gene transduction" The Journal of Rheumatology. 24. 1787-1795 (1997)
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[Publications] T.IKEDA: "Adenovirus Vector-Mediated Gene Transfer to Joints in Guinea Pig" Transduction of the 43th Annual Meeting of the Orthopaedic Research Society. 22. 430 (1997)
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[Publications] Y.ARAI: "Effects of TGF-β1 and HSP70 Gene Transfer to Chondrocytes Using Adenovirus Vector" Transduction of the 43th Annual Meeting of the Orthopaedic Research Society. 22. 341 (1997)
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[Publications] 池田巧: "アデノウイスルベクターを用いたモルモット膝関節への遺伝子導入" 日本整形外科学会雑誌. 71. S1564 (1997)
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[Publications] 新井祐志: "軟骨細胞の遺伝子治療における発現制御システムの開発" 日本整形外科学会雑誌. 71. S1382 (1997)
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[Publications] 久保俊一: "アデノウイルスベクターによる軟骨細胞に対する遺伝子導入法の検討" Academia. 171. 16-22 (1997)
