1998 Fiscal Year Annual Research Report

神経突起伸長と血管新生におけるグリコサミノグリカン糖鎖の分子認識

Research Project

Project/Area Number	09470509
Research Institution	Kobe Pharmaceutical University
Principal Investigator	菅原一幸神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (60154449)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山田修平神戸薬科大学, 薬学部, 助手 (70240017) 北川裕之神戸薬科大学, 薬学部, 講師 (40221915)
Keywords	コンドロイチン / コンドロイチン硫酸 / グリコサミノグリカン / ヘバラン硫酸 / 癌抑制遺伝子 / 神経突起 / EXT
Research Abstract	(1) マウス脳由来の神経突起伸長促進活性を有するコンドロイチン硫酸プロテオグリカンのコンドロイチン硫酸にDユニット[GlcA(2-sulfate)-GalNAc(6-sulfate)]という二糖単位の存在を示し、Dユニット含量の高いサメ軟骨コンドロイチン硫酸Dにも神経突起伸長促進活性を示した。 (2) パートタイムプロテオグリカンの一つα型トロンボモヂュリンにはβ-型に結合しているコンドロイチン硫酸がない。。α-トロンボモヂュリンの精密分析の結果、コンドロイチン硫酸の付け根に相当するGlcA-Gal-Gal-Xylという四糖を見い出し、四糖までは合成されていることを示した。 (3) ヒトメラノーマ細胞の無血清培地に、コンドロイチン硫酸の繰り返し二糖領域由来のオリゴ糖にβ-GalNAcとβ-GlcAを転移する活性をともに見い出し、この酵素系がα一トロンボモヂュリンのGlcA-Gal-Xylの上でコンドロイチンを重合することを示し、基質のコアタンパク質の重要性を示した。 (4) ヒトsarcoma細胞株の無血清培地にグリコサミノグリカンのコアタンパク質への結合領域に作用するα-GalNAc転移酵素活性を見い出し、α1-4GalNAc転移活性を示した。これをほぼ均一に精製し、そのペプチドシークエンスが癌抑制遺伝子EXT(hereditary multiple exostosis)ファミリーのメンバーEXTL2と一致することを示した。EXTL2のcDNAを可溶性タンパク質として発現させ、その活性を調べたところ、結合領域のGlcAβl-3Galβ1-3Galβ1-4Xyl-Serに対してα-GalNAc転移酵素の活性を示すと共に、化学合成したGlcAβ1-3Galβ1-O-naphtalenmethanolに対しては。α-GlcNAc転移酵素の活性をも示したので、本酵素がヘパラン硫酸合成の開始をつかさどり、コンドロイチン硫酸との仕分けを決定する鍵酵素であることが明らかになった。

Research Products

(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Clement,A.M.: "The DSD-1-epitope depends on sulfation,correlates with chondroitin sulfate D motifs,and is sufficient to promote neurite outgrowth" J.Biol.Chem.273(43). 28444-28453 (1998)
[Publications] 灘中里美: "Demonstration of the immature glycosaminoglycan tetrasaccharide sequence GlcAβ1-3Galβ1-3Galβ1-4Xyl on recombinant soluble human α-thrombomodulin.A possible mechanism generating “part-time" proteoglycans" J.Biol.Chem.273(50). 33728-33734 (1998)
[Publications] 北川裕之: "Identification and characterization of a novel UDP-GalNAc:GlcA β-R α1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase from a human sarcoma cell line" Glycobiology. (印刷中). (1999)
[Publications] 北川裕之: "The tumor suppressor EXT-like gene EXTL2 encodes an α1,4-N-acetylhexosaminyltransferase that transfers N-acetylgalactosamine and N-acetylglucosamine to the common glycosaminoglycan-protein linkage region.The key enzyme for the chain initiation of heparan sulfate" J.Biol.Chem.(印刷中). (1999)
[Publications] 灘中里美: "Involvement of the core protein in the first β-N-acetylgalactosamine transfer to the glycosaminoglycan-protein linkage region tetrasaccharide and in the subsequent polymerization:The critical determining step for chondroitin sulfate biosynthesis" Biochem.J.(印刷中). (1999)

1998 Fiscal Year Annual Research Report

神経突起伸長と血管新生におけるグリコサミノグリカン糖鎖の分子認識

Principal Investigator

菅原 一幸 神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (60154449)

Research Products

[Publications] Clement,A.M.: "The DSD-1-epitope depends on sulfation,correlates with chondroitin sulfate D motifs,and is sufficient to promote neurite outgrowth" J.Biol.Chem.273(43). 28444-28453 (1998)

[Publications] 灘中 里美: "Demonstration of the immature glycosaminoglycan tetrasaccharide sequence GlcAβ1-3Galβ1-3Galβ1-4Xyl on recombinant soluble human α-thrombomodulin.A possible mechanism generating “part-time" proteoglycans" J.Biol.Chem.273(50). 33728-33734 (1998)

[Publications] 北川 裕之: "Identification and characterization of a novel UDP-GalNAc:GlcA β-R α1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase from a human sarcoma cell line" Glycobiology. (印刷中). (1999)

菅原一幸神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (60154449)

[Publications] 灘中里美: "Demonstration of the immature glycosaminoglycan tetrasaccharide sequence GlcAβ1-3Galβ1-3Galβ1-4Xyl on recombinant soluble human α-thrombomodulin.A possible mechanism generating “part-time" proteoglycans" J.Biol.Chem.273(50). 33728-33734 (1998)

[Publications] 北川裕之: "Identification and characterization of a novel UDP-GalNAc:GlcA β-R α1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase from a human sarcoma cell line" Glycobiology. (印刷中). (1999)