1999 Fiscal Year Annual Research Report
ジーンノックアウト法を用いたHIおよびコアヒストンバリアントの機能解析の研究
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09480152
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| Research Institution | Miyazaki Medical College |
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Principal Investigator |
中山 建男 宮崎医科大学, 医学部, 教授 (60031712)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
武知 進士 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (10222100)
高見 恭成 宮崎医科大学, 医学部, 講師 (80236356)
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| Keywords | ヒストンバリアント / ジーンノックアウト法 / DT40株 / 転写制御 / クロマチン構造 / ヒストンデアセチラーゼ / イムノグロブリン / 細胞増殖 |
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| Research Abstract |
ニワトリBリンパ細胞由来のDT40株を用いて、種々のヒストンバリアントをコードする遺伝子を系統的にノックアウトして欠失変異株を作成した。さらに、アセチル化されたコアヒストンの脱アセチル化jを触媒するヒストンデアセチラーゼ(HDAC)の欠失変異株を作成した。これらの変異株の解析の結果、以下の成果を得た。
1)H1,H2A,H2B,H3,H4 の各ヒストンサブタイプの遺伝子群は幾つかの構成メンバーが欠失しても、同じサブタイプの残りの遺伝子の発現量が増大し、mRNA量を一定に保つ自己補償機能を有する。
2)細胞の生存には39個のヒストン遺伝子を含む約 110kb のクラスターの中で、約半分の遺伝子を含む半分の長さのクラスターで十分である。
3)細胞の生存には39個のヒストン遺伝子を含む約 110kb のクラスターの1つのアリルで十分である。
4)細胞の生存にはHI遺伝子は12コピーのうち1コピーで十分であること。
5)H1,H2A,H2B にはそれぞれ数種類のパリアントが存在する。これを単独で欠失した変異株の解析から、各バリアントは独自に特異的な転写制御機能を持つ可能性がある。
6)chHDAC-2はIgM H-cain量を転写とそのpre-mRNAの膜結合型から分泌型へのalternative processingの2つのステップで制御している。
7)chHDAC-3はDT40細胞の増殖に必須である。
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[Publications] Ahmad,A.et al.: "Wdrepeats of the p48 subunit of chicken chromatin assembly factor-1 required for in vitro interaction"J.Biol.Chem.. 274. 16646-16653 (1999)
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[Publications] Takami,Y.et al.: "Chicken Histone deacetylase-2 controls the amount of the IgM H-chain at the steps of both transcription"J.Biol.Chem.. 274. 23977-23990 (1999)
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[Publications] Takechi,S.et al.: "Sas3 is a histone acetyltransferase and requires a zinc finger motif"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 405-410 (1999)
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[Publications] Nakayama,T.et al.: "Interaction of the p48 subunit of chicken chromatin assembly factor-1 with histone deacetylases"Current Topics in Biochemical Research. 1. 173-178 (1999)
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[Publications] Takami,Y.et al.: "Histone Hl variants play individual roles in transcription regulation in the Dt40 chicken B cell line"Biochem.Biopys.Res.Commun.. (in press). (2000)
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[Publications] Takami,Y.et al.: "N-terminal,region,C-terminal region,unclear export signal and deacetylation activity of histone"J.Biol.Chem.. (in press). (2000)
