1998 Fiscal Year Annual Research Report
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09480166
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| Research Institution | Tokyo University of Science |
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Principal Investigator |
山登 一郎 東京理科大学, 基礎工学部, 教授 (70111458)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柿沼 喜己 千葉大学, 薬学部, 助教授 (80134394)
目黒 俊幸 東京理科大学, 基礎工学部, 助手
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| Keywords | 液胞型ATPアーゼ / Na^+輸送性ATPアーゼ / 腸内連鎖球菌 / 精製と再構成 |
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| Research Abstract |
交付申請書記載の本年度研究目的・実施計画を概ね順調に遂行することが出来た。
1. 本酵素の精製標品を用い、Na^+やATP.ADPなど基質の結合活性を調べた。膜結合部分は、常にNa^+に対し高い親和性を持っていた。ATP添加により、その親和性が低下した。つまり、結合しているNa^+を膜の外側で遊離させる段階にATPのエネルギーを使用しているというエネルギー共役機構を示すことができた。
2. 再構成系からEDTA処理により遊離させた触媒頭部部分(V_1)と残った膜結合部分(V_0)のペプチドの同定を行い、サブユニットIとKが膜結合性であることが分かった。サブユニットGだけはどちらとも判定できなかった。また膜結合部分のイオン透過活性を調べた結果、膜部分だけで膜電位依存のNa^+透過活性を有していた。しかし、その活性はチャンネル活性とは考えられなかった。
3. カラムクロマトグラフィーを用いて、本酵素(V_1V_0)の大量精製に成功した。そこで、その結晶化を試みている。
4. 本ATPアーゼ触媒頭部(V_1)精製標品の結晶化を行った。現在X線照射による構造解析を行っている。また、F_1との構造類似性を基に、分子モデリングによりV_1の三次元構造を推定した。
5. 各サブユニット欠失株の各種条件下における生育を調べた結果、すべてのサブユニットが高塩濃度、アルカリ条件下での細胞生育に必須であることが分かった。
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[Publications] A.Suenaga: "Molecula dynamics simulation of unfoldong of histidine-containing phosphocarrier prtein in water." J.Chem.Software. 4No.4. 127-142 (1998)
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[Publications] A.Suenaga: "Computational observation of an ion permeation process through a channel protein." Bioscience Reports. 4No.1. 39-48 (1998)
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[Publications] Y.Takeda: "Sequencing and characterization of xyl operon of a Gram-positive bacterium,Tetragenococcus halophila." Appl.Environ.Microbiol.64No.7. 2513-2519 (1998)
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[Publications] K.Abe: "Xylose transport insensitive to catabolite inhibition by phosphoenolpyruvate:sugar phosphotransferase system in Tetragenococcus halophila." Biosci.Biotechnol.Biochem.62No.9. 1676-1683 (1998)
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[Publications] T.Murata: "Properties of the V_0V_1 Na^+-ATPase from Enterococcus hirae and Its V_0 moiety." J.Biochem(Tokyo). 125No.2. 414-421 (1999)
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[Publications] Y.Kakinuma: "Structure and function of vacuolar Na^+-translocating ATPase in Enterococcus hirae." J.Bioenerg.Biomembr.(in press). (1999)
